| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 副溶血性弧菌简介 | 第10页 |
| 1.2 副溶血性弧菌检测方法 | 第10-20页 |
| 1.2.1 培养法 | 第11页 |
| 1.2.2 显色培养法 | 第11页 |
| 1.2.3 免疫学法 | 第11-12页 |
| 1.2.4 核酸杂交法 | 第12页 |
| 1.2.5 聚合酶链式反应 | 第12-14页 |
| 1.2.6 等温核酸扩增技术 | 第14-20页 |
| 1.2.6.1 链置换扩增技术 | 第15-16页 |
| 1.2.6.2 依赖解旋酶的等温核酸扩增技术 | 第16-18页 |
| 1.2.6.3 环介导等温核酸扩增技术 | 第18-19页 |
| 1.2.6.4 链交换扩增技术 | 第19-20页 |
| 1.3 本论文的研究意义与主要内容 | 第20-22页 |
| 第二章 依赖于解旋酶等温核酸扩增反应对副溶血性弧菌检测的研究 | 第22-52页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 实验部分 | 第23-33页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第23页 |
| 2.2.2 仪器与试剂 | 第23-25页 |
| 2.2.3 相关溶液和培养基的配制 | 第25-29页 |
| 2.2.3.1 热稳定解旋酶克隆溶液和培养基及其配制 | 第25-26页 |
| 2.2.3.2 热稳定解旋酶重组蛋白纯化相关试剂 | 第26页 |
| 2.2.3.3 热稳定解旋酶聚丙烯酰胺凝胶电泳相关试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3.4 HDA改进的Buffer溶液 | 第27页 |
| 2.2.3.5 副溶血性弧菌培养基的配制及增菌培养 | 第27-28页 |
| 2.2.3.6 副溶血性弧菌基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 PCR产物回收 | 第29页 |
| 2.2.5 重组表达载体pET-15b-Tte-UvrD的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.6 表达重组热稳定解旋酶(Tte-UvrD)构建和诱导表达 | 第30-31页 |
| 2.2.7 亲和层析纯化重组热稳定解旋酶 | 第31-32页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.8.1 琼脂糖凝胶电泳的原理 | 第32页 |
| 2.2.8.2 琼脂糖凝胶电泳的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.9 实时荧光检测体系 | 第33页 |
| 2.2.9.1 PCR扩增的反应体系 | 第33页 |
| 2.2.9.2 基于解旋酶解链的反应体系 | 第33页 |
| 2.2.9.3 HDA等温核酸扩增反应体系 | 第33页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第33-51页 |
| 2.3.1 工程菌的菌落PCR鉴定与重组表达载体的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.2 热稳定解旋酶(Tte-UvrD)序列分析 | 第34-36页 |
| 2.3.3 热稳定解旋酶(TTE-UVRD)基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.3.4 亲和层析纯化重组热稳定解旋酶 | 第37-38页 |
| 2.3.5 耐热解旋酶酶活力测定 | 第38-42页 |
| 2.3.6 副溶血性弧菌基因组DNA电泳结果 | 第42-43页 |
| 2.3.7 HDA反应对副溶血性弧菌检测的研究 | 第43-51页 |
| 2.3.7.1 HDA方法检测副溶血性弧菌的可行性 | 第43-44页 |
| 2.3.7.2 HDA方法检测副溶血性弧菌的灵敏度 | 第44-45页 |
| 2.3.7.3 灵敏性条件的优化 | 第45-48页 |
| 2.3.7.4 HDA方法检测副溶血性弧菌的特异性 | 第48-49页 |
| 2.3.7.5 HDA方法检测副溶血性弧菌的抗干扰能力 | 第49-50页 |
| 2.3.7.6 HDA方法检测副溶血性弧菌液 | 第50-51页 |
| 2.4 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 变性泡介导的链交换引发的恒温核酸检测方法对副溶血性弧菌的检测研究 | 第52-72页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 实验部分 | 第52-56页 |
| 3.2.1 仪器与试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.2 副溶血性弧菌培养基的配制及增菌培养 | 第53页 |
| 3.2.3 模拟实际样品的副溶血性弧菌的增菌过程 | 第53-54页 |
| 3.2.4 SEA反应体系 | 第54页 |
| 3.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳的配制 | 第54-56页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第56-70页 |
| 3.3.1 甲酰胺对SEA反应的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.2 实验条件的优化 | 第57-63页 |
| 3.3.2.1 不同Buffer的优化 | 第57-58页 |
| 3.3.2.2 聚合酶量的优化 | 第58-59页 |
| 3.3.2.3 不同浓度甲酰胺的优化 | 第59-60页 |
| 3.3.2.4 不同浓度dNTPs的优化 | 第60-61页 |
| 3.3.2.5 不同浓度PEG-200的优化 | 第61-62页 |
| 3.3.2.6 引物温度的优化 | 第62-63页 |
| 3.3.3 灵敏性的检测 | 第63-64页 |
| 3.3.4 特异性检测 | 第64-65页 |
| 3.3.5 抗干扰能力的检测 | 第65-66页 |
| 3.3.6 副溶血性弧菌菌液的检测 | 第66-67页 |
| 3.3.7 副溶血性弧菌比色检测 | 第67-69页 |
| 3.3.8 模拟实际样品的副溶血性弧菌菌液的检测 | 第69-70页 |
| 3.4 小结 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 附录：论文中使用的缩略词 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第81-82页 |
