| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-19页 |
| 1.1 防御素的研究进展 | 第8-14页 |
| 1.1.1 防御素的分类 | 第8-12页 |
| 1.1.2 防御素的抗菌机理及生物学活性 | 第12页 |
| 1.1.3 抗病毒作用及其活性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 其他生物学活性 | 第13页 |
| 1.1.5 防御素的应用前景 | 第13-14页 |
| 1.2 猪源抗菌肽 | 第14-19页 |
| 1.2.1 猪源抗菌肽的种类 | 第14-17页 |
| 1.2.2 利用生物技术对防御素的研究状况 | 第17-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-31页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第20-21页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 3.1.2 菌种及质粒 | 第20页 |
| 3.1.3 工具酶 | 第20页 |
| 3.1.4 主要试剂及配制 | 第20页 |
| 3.1.5 培养基 | 第20-21页 |
| 3.2 实验方法 | 第21-31页 |
| 3.2.1 猪肝脏总RNA 提取---Trizol 法 | 第21页 |
| 3.2.2 引物的设计与合成 | 第21页 |
| 3.2.3 RT-PCR | 第21-22页 |
| 3.2.4 PCR 产物的回收和纯化 | 第22-23页 |
| 3.2.5 回收的PCR 产物与PMD19-T 载体的连接 | 第23页 |
| 3.2.6 感受态细胞的制备及转化 | 第23-24页 |
| 3.2.7 质粒的提取 | 第24页 |
| 3.2.8 重组质粒PMD19-T-fPBD2 的鉴定 | 第24-25页 |
| 3.2.9 PBD2 基因成熟肽序列cPBD2 的克隆 | 第25-26页 |
| 3.2.10 重组质粒PMD19-T-cPBD2 的鉴定 | 第26页 |
| 3.2.11 表达载体PET30a-PBD2 的构建 | 第26-27页 |
| 3.2.12 重组质粒pET30a-PBD2 的鉴定 | 第27页 |
| 3.2.13 重组工程菌株BL21-pET30a-PBD2 的诱导表达 | 第27页 |
| 3.2.14 PBD2 表达蛋白的纯化与检测 | 第27-31页 |
| 3.2.15 目的蛋白抗菌活性的体外活性分析 | 第31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-38页 |
| 4.1 RNA 提取结果 | 第31-32页 |
| 4.2 RT-PCR 结果 | 第32页 |
| 4.3 PMD19-T-fPBD2 鉴定 | 第32-33页 |
| 4.3.1 PCR 鉴定 | 第32页 |
| 4.3.2 双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 4.3.3 重组质粒的序列测定结果 | 第33页 |
| 4.4 cPBD2 成熟肽序列的PCR 扩增结果 | 第33-34页 |
| 4.5 重组质粒PMD19-T-cPBD2 的鉴定结果 | 第34-35页 |
| 4.5.1 PCR 鉴定结果 | 第34页 |
| 4.5.2 重组质粒PMD19-T-cPBD2 的双酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
| 4.5.3 重组质PMD19-T-cPBD2 的测序结果 | 第35页 |
| 4.6 重组表达质粒PET30a-PBD2 的鉴定结果 | 第35-36页 |
| 4.6.1 PET30a-PBD2 的PCR 鉴定结果 | 第35页 |
| 4.6.2 双酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| 4.6.3 测序结果鉴定 | 第36页 |
| 4.7 蛋白活性的检测 | 第36-38页 |
| 4.7.1 体外抗菌活性的检测结果 | 第36-37页 |
| 4.7.2 目的蛋白热稳定性 | 第37-38页 |
| 5 结论与讨论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| ABSTRACT | 第46页 |
