| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 第一节 Oct4转录因子简介 | 第12-15页 |
| ·转录因子Oct4的概况 | 第12-13页 |
| ·转录因子Oct4的结构 | 第13-14页 |
| ·转录因子Oct4的分布和功能 | 第14-15页 |
| 第二节 EMT概况 | 第15-16页 |
| 第三节 Oct4与EMT | 第16-17页 |
| 第四节 钙池操纵的胞外钙离子内流(SOCE) | 第17-21页 |
| ·钙离子的作用 | 第17页 |
| ·受体介导的钙离子通道 | 第17-18页 |
| ·SOC结构和功能 | 第18-19页 |
| ·SOC作用方式及相关信号通路 | 第19-20页 |
| ·SOC与肿瘤迁移 | 第20-21页 |
| 第二章 主要材料、仪器及试剂 | 第21-25页 |
| 第一节 主要材料 | 第21页 |
| 第二节 主要仪器 | 第21-22页 |
| 第三节 主要试剂 | 第22-23页 |
| 第四节 主要配制试剂配方 | 第23-25页 |
| 第三章 实验方法 | 第25-33页 |
| 第一节 聚合酶链式反应(PCR) | 第25-28页 |
| ·RNA提取 | 第25-26页 |
| ·反转录 | 第26页 |
| ·PCR | 第26-28页 |
| 第二节 免疫荧光(Immunofluorence) | 第28-29页 |
| ·免疫荧光具体步骤 | 第28页 |
| ·免疫荧光实验相关抗体浓度 | 第28-29页 |
| 第三节 蛋白印迹(Western blot) | 第29-31页 |
| ·蛋白提取 | 第29页 |
| ·Western blot具体步骤 | 第29-30页 |
| ·Western blot实验相关抗体浓度 | 第30-31页 |
| 第四节 细胞迁移和浸润实验 | 第31-32页 |
| ·细胞迁移 | 第31页 |
| ·细胞浸润 | 第31-32页 |
| 第五节 胞外钙离子内流测定 | 第32-33页 |
| 第四章 实验结果与分析 | 第33-52页 |
| 第一节 转录因子Oct4在相同来源但转移侵袭特性不同的两株乳腺癌细胞系中表达存在显著差异 | 第33-35页 |
| ·半定量RT-PCR检测MCF-7和MDA-MB-231细胞系中上皮和间充质标志分子mRNA的表达水平 | 第33-34页 |
| ·Western blot及免疫荧光染色方法检测MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞系中EMT主要标志蛋白分子的表达水平 | 第34-35页 |
| ·Western blot检测MCF-7和MDA-MB-231两种乳腺癌细胞系中转录因子Oct4的表达情况 | 第35页 |
| 第二节 TGF-β 1诱导MCF-7细胞EMT | 第35-37页 |
| ·TGF-β 1可诱导体外培养的MCF-7细胞发生EMT样的形态改变,并失去上皮细胞标志蛋白E-cadherin的表达,开始表达间充质标志物α-SMA | 第35-36页 |
| ·TGF-β 1可增强MCF-7细胞的迁移和浸润能力 | 第36-37页 |
| 第三节 TGF-β 1可抑制MCF-7细胞中Oct4的表达,并且抑制效果呈现剂量及时间依赖性 | 第37-38页 |
| ·TGF-β 1可抑制MCF-7细胞中Oct4的表达,并且抑制效果呈现剂量及时间依赖性 | 第37-38页 |
| 第四节 转录因子Oct4抑制EMT相关乳腺癌细胞的迁移和浸润 | 第38-41页 |
| ·RT-PCR方法检测沉默转录因子Oct4后MCF-7细胞上皮及间充质相关标志蛋白mRNA的表达水平。 | 第38-39页 |
| ·Western blot方法检测沉默转录因子Oct4后MCF-7细胞上皮及间充质相关标志蛋白的表达水平。 | 第39-40页 |
| ·用免疫荧光染色的方法检测沉默转录因子Oct4以及TGF-b1刺激后,MCF-7细胞系中上皮细胞标志物E-cadherin与间充质细胞标志物α-SMA的表达。 | 第40页 |
| ·沉默Oct4后MCF-7细胞迁移和浸润能力明显增强 | 第40-41页 |
| 第五节 TGF-β 1能够促进胞外钙离子内流增加,且此效应能被CRAC钙离子通道功能的抑制而阻抑 | 第41-44页 |
| ·TGF-β 1作用MCF-7细胞36小时后,增强了细胞钙池操纵的钙离子内流效应(SOCE) | 第41-42页 |
| ·STIM1表达下调抑制MCF-7细胞的胞外钙离子内流 | 第42-43页 |
| ·STIM1表达下调抑制TGF-β1诱导的MCF-7细胞胞外钙离子内流 | 第43页 |
| ·TGF-β 1作用诱导MCF-7细胞CRAC离子通道组分STIM1和Orail表达上调 | 第43-44页 |
| 第六节 钙池操纵的胞外钙内流效应参与调控TGF-β 1诱导MCF-7细胞EMT | 第44-46页 |
| ·CRAC通道抑制剂2-APB及CRAC通道关键组分STIM1表达下调能够抑制TGF-β 1诱导的MCF-7细胞EMT | 第44-45页 |
| ·CRAC钙离子通道抑制剂2-APB及沉默CRAC通道关键组分STIM1的沉默能够阻抑TGF-β 1对于MCF-7细胞迁移和浸润的促进作用 | 第45-46页 |
| 第七节 SOCE效应参与调控Oct4介导的EMT事件 | 第46-52页 |
| ·Oct4转录因子表达下调能够促进MCF-7细胞的SOCE效应 | 第46-47页 |
| ·Oct4表达下调能够引起胞外钙离子内流增加,其作用可被CRAC通道抑制剂2-APB抑制 | 第47-48页 |
| ·Oct4表达下调能够引起胞外钙离子内流增加,其作用可STIM1分子的下调表达而抑制 | 第48-49页 |
| ·Oct4介导的SOCE效应能够调控其介导的EMT事件 | 第49-50页 |
| ·Oct4介导的SOCE效应能够调控其介导的EMT事件 | 第50-52页 |
| 第五章 讨论 | 第52-55页 |
| 第六章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 个人简历 | 第60-61页 |
