| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 肝癌简介 | 第10页 |
| 1.2 全外显子测序技术产生背景 | 第10-14页 |
| 1.2.1 全外显子组测序技术简介 | 第11页 |
| 1.2.2 全外显子组测序技术在肿瘤学方面的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.3 本实验室利用全外显子组测序技术的研究背景 | 第12-14页 |
| 1.3 原发性肝癌病例类型简介 | 第14-16页 |
| 1.3.1 AFP阴性肝癌简介 | 第14页 |
| 1.3.2 肝内胆管细胞癌简介 | 第14-16页 |
| 1.4 研究目的、内容与技术路线 | 第16-19页 |
| 1.4.1 研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 1.4.2 研究内容及技术路线 | 第17-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-30页 |
| 2.1 实验仪器、试剂和材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验相关样本 | 第20-22页 |
| 2.1.4 TP53外显子测序以及分化标志物基因引物序列 | 第22-23页 |
| 2.1.5 实验相关候选突变基因引物序列 | 第23页 |
| 2.2. 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 获取临床组织样本 | 第23页 |
| 2.2.2 肝癌组织样本DNA抽提 | 第23-24页 |
| 2.2.3 Hotstar聚合酶PCR体系 | 第24页 |
| 2.2.4 全外显子组测序技术简介 | 第24-26页 |
| 2.2.5 Sanger-PCR法测序 | 第26页 |
| 2.2.6 抽提肝癌组织样本的RNA | 第26-27页 |
| 2.2.7 RNA逆转录成cDNA | 第27-28页 |
| 2.2.8 半定量PCR | 第28页 |
| 2.2.9 实时定量PCR | 第28-29页 |
| 2.2.10 统计方法 | 第29-30页 |
| 第3章 实验结果与讨论 | 第30-60页 |
| 3.1 AFP阴性肝细胞癌的基因突变谱鉴定及验证分析 | 第30-40页 |
| 3.1.1 AFP阴性肝细胞癌病例的临床病理分析 | 第30-31页 |
| 3.1.2 AFP阴性肝细胞癌病例高通量测序分析 | 第31-36页 |
| 3.1.3 Sanger-PCR对AFP阴性肝细胞癌候选突变基因验证分析 | 第36-39页 |
| 3.1.4 得到验证的候选突变基因及其功能简介 | 第39-40页 |
| 3.1.5 小结 | 第40页 |
| 3.2 肝内胆管细胞癌的基因突变谱鉴定及验证分析 | 第40-49页 |
| 3.2.1 肝内胆管癌病例的临床病理分析 | 第40-41页 |
| 3.2.2 肝内胆管癌病例高通量测序分析 | 第41-43页 |
| 3.2.3 Sanger-PCR对肝内胆管细胞癌的突变基因验证分析 | 第43-48页 |
| 3.2.4 得到验证的候选突变基因及其功能简介 | 第48-49页 |
| 3.2.5 小结 | 第49页 |
| 3.3 分化相关标志物基因在肝细胞癌组织中的表达特征分析 | 第49-57页 |
| 3.3.1 实验相关肝癌病例的临床病理 | 第49-52页 |
| 3.3.2 实验相关肝癌病例致病基因TP53突变情况分析 | 第52页 |
| 3.3.3 胎肝标志物AFP及肝干祖细胞指标DLK1、EPCAM在不同类型肝癌组织中mRNA的表达特征 | 第52-54页 |
| 3.3.4 成熟肝细胞标志物ALB,角蛋白18(CK-18)及肝脏胆管细胞标志物角蛋白19(CK-19)在不同类型肝癌组织中的表达情况 | 第54-55页 |
| 3.3.5 多能干细胞转录调控因子OCT4、SOX2及NANOG在肝癌组织中的表达特征 | 第55-56页 |
| 3.3.6 讨论与小结 | 第56-57页 |
| 3.4 总结与讨论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-76页 |
| 研究生期间发表论文 | 第76页 |
