| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 组织工程概念 | 第11-12页 |
| 1.2 种子细胞 | 第12-13页 |
| 1.2.1 成熟体细胞 | 第12-13页 |
| 1.2.2 间充质干细胞 | 第13页 |
| 1.3 生物支架材料 | 第13-16页 |
| 1.4 生物材料与细胞间相互作用的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.4.1 干细胞壁龛的概念 | 第16-17页 |
| 1.4.2 生物材料化学性质对细胞行为的影响 | 第17页 |
| 1.4.3 生物材料力学性质对细胞行为的影响 | 第17-18页 |
| 1.4.4 生物材料物理结构对细胞行为的影响 | 第18-19页 |
| 1.4.5 生物材料物理特性调节细胞行为的机制研究 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题的提出 | 第20-22页 |
| 第2章 三维多孔支架的制作及表征 | 第22-30页 |
| 2.1 概述 | 第22页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 明胶微球的制备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 三维多孔支架的制备 | 第23页 |
| 2.2.3 制备FITC-gelatin标记的三维多孔支架 | 第23页 |
| 2.2.4 扫描电镜观察 | 第23-24页 |
| 2.2.5 支架孔隙率的测定 | 第24页 |
| 2.2.6 支架连通性的测定 | 第24页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第24-28页 |
| 2.3.1 明胶微球形态和三维多孔支架微观结构 | 第24-26页 |
| 2.3.2 三维多孔支架孔径大小及其分布 | 第26-27页 |
| 2.3.3 FITC-gelatin标记的三维多孔支架 | 第27页 |
| 2.3.4 支架的孔隙率 | 第27-28页 |
| 2.3.5 支架的连通性表征 | 第28页 |
| 2.4 本章小结 | 第28-30页 |
| 第3章 三维多孔支架孔径对hAMSCs粘附、增殖以及分化的影响 | 第30-53页 |
| 3.1 概述 | 第30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-36页 |
| 3.2.1 羊膜组织来源 | 第30页 |
| 3.2.2 hAMSCs的分离与培养 | 第30-31页 |
| 3.2.3 细胞冻存 | 第31页 |
| 3.2.4 细胞复苏 | 第31页 |
| 3.2.5 三维多孔支架的预处理 | 第31页 |
| 3.2.6 细胞接种 | 第31-32页 |
| 3.2.7 CCK-8检测 | 第32页 |
| 3.2.8 细胞骨架和细胞核染色 | 第32页 |
| 3.2.9 细胞死活染色 | 第32页 |
| 3.2.10 蛋白浓度的测定 | 第32-33页 |
| 3.2.11 细胞免疫荧光染色 | 第33页 |
| 3.2.12 SEM观察 | 第33页 |
| 3.2.13 茜素红染色 | 第33页 |
| 3.2.14 Ca含量的测定 | 第33页 |
| 3.2.15 NBT染色 | 第33-34页 |
| 3.2.16 ALP活性测定 | 第34页 |
| 3.2.17 番红-O染色 | 第34页 |
| 3.2.18 阿利新蓝染色 | 第34页 |
| 3.2.19 Ⅱ型胶原免疫荧光染色 | 第34页 |
| 3.2.20 DNA和GAG测定 | 第34-35页 |
| 3.2.21 逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第35-36页 |
| 3.2.22 统计学分析 | 第36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-52页 |
| 3.3.1 hAMSCs在不同孔径的三维多孔支架上的粘附 | 第36-37页 |
| 3.3.2 三维多孔支架孔径对hAMSCs活性和迁移的影响 | 第37-41页 |
| 3.3.3 三维多孔支架孔径对hAMSCs粘附蛋白表达的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.4 三维多孔支架孔径对hAMSCs成骨诱导增殖的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 三维多孔支架孔径对hAMSCs成骨诱导分化能力的影响 | 第44-48页 |
| 3.3.6 三维多孔支架孔径对hAMSCs成软骨诱导分化能力的影响 | 第48-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第4章 三维多孔支架孔径对软骨细胞去分化和再分化行为的影响 | 第53-61页 |
| 4.1 概述 | 第53-54页 |
| 4.2 材料与方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 rACs的分离与冻存 | 第54页 |
| 4.2.2 细胞的复苏 | 第54页 |
| 4.2.3 三维多孔支架的预处理 | 第54页 |
| 4.2.4 接种 | 第54页 |
| 4.2.5 CCK-8检测 | 第54页 |
| 4.2.6 番红-O染色 | 第54页 |
| 4.2.7 阿利新蓝染色 | 第54-55页 |
| 4.2.8 DNA和GAG测定 | 第55页 |
| 4.2.9 统计学分析 | 第55页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 4.3.1 三维多孔支架孔径对P_1 rACs增殖的影响 | 第55页 |
| 4.3.2 三维多孔支架的孔径对P_1 rACs去分化的影响 | 第55-58页 |
| 4.3.3 三维多孔支架的孔径对P_3 rACs再分化的影响 | 第58-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第5章 三维多孔支架中共培养hAMSCs和HUVEC的成骨分化 | 第61-71页 |
| 5.1 概述 | 第61-62页 |
| 5.2 材料与方法 | 第62-63页 |
| 5.2.1 细胞分离与培养 | 第62页 |
| 5.2.2 细胞冻存 | 第62页 |
| 5.2.3 细胞复苏 | 第62页 |
| 5.2.4 三维多孔支架的预处理 | 第62页 |
| 5.2.5 细胞接种 | 第62-63页 |
| 5.2.6 CCK-8检测 | 第63页 |
| 5.2.7 茜素红染色 | 第63页 |
| 5.2.8 NBT染色 | 第63页 |
| 5.2.9 CD31免疫荧光染色 | 第63页 |
| 5.2.10 Ca含量的测定 | 第63页 |
| 5.2.11 统计学分析 | 第63页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第63-69页 |
| 5.3.1 不同培养条件下hAMSC_s与HUVEC在三维多孔支架上的增殖和成骨分化效果 | 第63-67页 |
| 5.3.2 HUVEC细胞数量对hAMSC_s在三维多孔支架上成骨分化的影响 | 第67-69页 |
| 5.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第6章 全文总结与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间的发表文章 | 第83页 |
