| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-30页 |
| 1.1 胚胎干细胞 | 第11-12页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞的发现与历史 | 第11页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞的生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 胚胎干细胞的应用 | 第12页 |
| 1.2 神经干细胞 | 第12-24页 |
| 1.2.1 神经干细胞 | 第12-13页 |
| 1.2.2 成体神经干细胞的分布 | 第13-14页 |
| 1.2.3 神经干细胞的发育 | 第14-16页 |
| 1.2.4 神经干细胞的分类 | 第16-18页 |
| 1.2.5 神经干细胞的体外培养 | 第18-19页 |
| 1.2.5.1 神经球悬浮培养 | 第18页 |
| 1.2.5.2 单层贴壁培养 | 第18-19页 |
| 1.2.6 神经上皮干细胞的特性 | 第19-21页 |
| 1.2.6.1 具有自我更新和多向分化潜能 | 第19页 |
| 1.2.6.2 特异性表达的分子标记蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.6.3 玫瑰花环(Neural rosette)的形成 | 第20页 |
| 1.2.6.4 顶-基(Apical-basal)极性的形成 | 第20-21页 |
| 1.2.6.5 核位移(Interkinetic nuclear migration,IKNM) | 第21页 |
| 1.2.7 神经管(Neural tube,NT)的发育形成 | 第21页 |
| 1.2.8 神经管神经干细胞的增殖和形态 | 第21-22页 |
| 1.2.9 神经干细胞在疾病中的功能 | 第22-23页 |
| 1.2.10 潜在的应用价值 | 第23-24页 |
| 1.2.10.1 中枢神经系统的再生医疗 | 第23-24页 |
| 1.2.10.2 体外3D培养模拟中枢神经系统发育的模型和与生物活性支架结合治疗创伤性脑损伤 | 第24页 |
| 1.3 大脑皮层 | 第24-30页 |
| 1.3.1 大脑皮层 | 第24-26页 |
| 1.3.2 大脑皮层的细胞结构 | 第26-27页 |
| 1.3.3 大脑皮层的发育 | 第27页 |
| 1.3.4 皮层前体细胞的类型 | 第27-28页 |
| 1.3.4.1 apical前体细胞 | 第28页 |
| 1.3.4.2 basal前体细胞 | 第28页 |
| 1.3.4.3 Subapical前体细胞 | 第28页 |
| 1.3.5 皮层前体细胞的潜在临床应用价值 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-44页 |
| 2.1 材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 实验动物及细胞 | 第30页 |
| 2.1.2 主要溶液配制 | 第30-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-44页 |
| 2.2.1 细胞的冻存与复苏 | 第32页 |
| 2.2.2 MEFs的分离培养及饲养层的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.3 胚胎干细胞的培养 | 第33页 |
| 2.2.3.1 饲养层的准备 | 第33页 |
| 2.2.3.2 胚胎干细胞传代培养 | 第33页 |
| 2.2.4 神经上皮干细胞(NESC)诱导 | 第33页 |
| 2.2.5 神经上皮干细胞(NESC)的传代培养 | 第33-34页 |
| 2.2.6 单细胞克隆实验 | 第34页 |
| 2.2.7 胶质细胞的准备 | 第34页 |
| 2.2.8 神经上皮干细胞分化 | 第34-35页 |
| 2.2.9 NESCs向大脑皮层神经元分化 | 第35页 |
| 2.2.10 神经元的电生理膜片钳记录 | 第35页 |
| 2.2.11 神经上皮干细胞修饰由于叶酸缺乏导致的神经管缺陷 | 第35页 |
| 2.2.12 细胞免疫化学染色 | 第35-36页 |
| 2.2.13 质粒的准备 | 第36-38页 |
| 2.2.13.1 质粒的转化 | 第36页 |
| 2.2.13.2 质粒的抽提 | 第36-38页 |
| 2.2.13.3 质粒电泳 | 第38页 |
| 2.2.14 病毒的包装 | 第38-39页 |
| 2.2.15 质粒的电转 | 第39-40页 |
| 2.2.16 RNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.2.17 RNA反转录为CDNA | 第41-42页 |
| 2.2.18 细胞的移植 | 第42页 |
| 2.2.18.1 新生胎猴移植 | 第42页 |
| 2.2.18.2 新生小鼠细胞移植 | 第42页 |
| 2.2.18.3 畸胎瘤实验 | 第42页 |
| 2.2.19 灌流 | 第42-44页 |
| 第三章 建立神经上皮干细胞培养体系,模拟神经管发育和疾病研究 | 第44-65页 |
| 3.1 研究背景和目的 | 第44-45页 |
| 3.2 实验结果 | 第45-64页 |
| 3.2.1 胚胎干细胞 | 第45页 |
| 3.2.2 胚胎干细胞快速诱导成神经上皮干细胞,NESCs在体外长时间进行自我更新并维持其特性 | 第45-49页 |
| 3.2.3 单个神经上皮干细胞自我重组形成类神经管结构 | 第49-51页 |
| 3.2.4 单个神经上皮干细胞在体外产生功能神经元并广泛整合到大脑皮层 | 第51-54页 |
| 3.2.5 NESCs向RGPC转变依赖WNT信号通路以及控制NESC-TO-NTs的机制 | 第54-60页 |
| 3.2.6 “NESC-TO-NTs”神经管模型模拟叶酸缺失的NTD | 第60-64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-65页 |
| 第四章 利用神经上皮干细胞分化高纯度的皮层投射神经元 | 第65-84页 |
| 4.1 研究背景和目的 | 第65页 |
| 4.2 实验结果 | 第65-80页 |
| 4.2.1 人胚胎干细胞快速转变为神经上皮干细胞(NESCs) | 第65-69页 |
| 4.2.2 NESCs在体外产生成熟神经元 | 第69-71页 |
| 4.2.3 NESCs分化为大量离皮质投射神经元和少量中间神经元 | 第71-73页 |
| 4.2.4 单个NESCs以同样的方式产生皮层离皮质神经元和少量的中间神经元 | 第73-75页 |
| 4.2.5 NESCs广泛整合到新生小鼠脑中 | 第75-78页 |
| 4.2.6 NESCs在体内分化为离皮质神经元和中间神经元 | 第78-80页 |
| 4.3 讨论 | 第80-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90-93页 |
| 在读期间宪成的学术论文与取得的研究成果 | 第93页 |
