| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌毒素蛋白简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 晶体毒素 (δ-内毒素) | 第12-13页 |
| 1.1.2 分泌型毒素 | 第13-14页 |
| 1.1.3 Parasporins | 第14页 |
| 1.1.4 其它杀虫毒素 | 第14-15页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌Parasporin proteins的结构与功能 | 第15-18页 |
| 1.2.1 Parasporin-1 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Parasporin-2 | 第16页 |
| 1.2.3 Parasporin-3 | 第16-17页 |
| 1.2.4 Parasporin-4 | 第17页 |
| 1.2.5 Parasporin-5 | 第17-18页 |
| 1.2.6 Parasporin-6 | 第18页 |
| 1.3 抗肿瘤药物的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.1 抗肿瘤药物研究现状 | 第18页 |
| 1.3.2 抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡机制 | 第18-19页 |
| 1.4 立题依据和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和细胞 | 第20-21页 |
| 2.1.2 引物 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基和抗生素 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-39页 |
| 2.2.1 目的基因的合成、克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.2 pcDNA5-FRT/TO-Flag-PS5重组质粒的构建及鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.3 Western Blot检测重组质粒在HEK293T中的表达 | 第28-29页 |
| 2.2.4 质谱鉴定PS5蛋白 | 第29-30页 |
| 2.2.5 EGFP-PS5和EGFP-PS5活性片段重组质粒的构建及鉴定 | 第30-33页 |
| 2.2.6 Western Blot检测融合蛋白在HEK293T中的表达 | 第33页 |
| 2.2.7 EGFP-PS5在HEK293T细胞内定位及对细胞的影响.22 | 第33-34页 |
| 2.2.8 EGFP-PS5及PS5活性片段在HeLa细胞内定位及对细胞的影响 | 第34-36页 |
| 2.2.9 PS5蛋白诱导He La细胞凋亡检测 | 第36页 |
| 2.2.10 质谱分析PS5蛋白相关作用蛋白 | 第36页 |
| 2.2.11 shRNA干扰并筛选目的基因沉默细胞系 | 第36-38页 |
| 2.2.12 PS5蛋白对筛选到的细胞系的影响 | 第38-39页 |
| 第三章 结果和分析 | 第39-58页 |
| 3.1 Parasporin-5 真核表达 | 第39-46页 |
| 3.1.1 PS5的原始基因序列与优化后基因序列比较 | 第39-40页 |
| 3.1.2 pcDNA5-FRT/TO-Flag-PS5的构建及鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.3 pcDNA5-FRT/TO-Flag-PS5在HEK293T细胞中的表达 | 第41-42页 |
| 3.1.4 PS5蛋白的质谱鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.5 EGFP-PS5及EGFP-PS5活性片段重组质粒的构建及鉴定 | 第43-45页 |
| 3.1.6 重组质粒在HEK293T细胞中的表达 | 第45-46页 |
| 3.2 PS5蛋白的抗肿瘤活性 | 第46-50页 |
| 3.2.1 PS5蛋白对肿瘤细胞形态的影响 | 第46-48页 |
| 3.2.2 扫描电镜观察PS5蛋白对He La细胞表型的影响 | 第48页 |
| 3.2.3 PS5蛋白对HEK293T细胞增殖的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.4 PS5蛋白在HEK293T和He La细胞内的定位 | 第49-50页 |
| 3.3 PS5蛋白抗肿瘤机制研究 | 第50-58页 |
| 3.3.1 PS5蛋白对细胞亚细胞结构的影响 | 第50-52页 |
| 3.3.2 细胞凋亡检测 | 第52-53页 |
| 3.3.3 免疫沉淀分离PS5蛋白的结合蛋白 | 第53-54页 |
| 3.3.4 质谱分析PS5蛋白的结合蛋白 | 第54-56页 |
| 3.3.5 PS5蛋白对筛选的细胞系的作用 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-60页 |
| 4.1 PS5蛋白外源表达系统的选择 | 第58页 |
| 4.2 PS5蛋白在肿瘤细胞中表达后的活性分析及活性机制初探 | 第58-60页 |
| 第五章 小结与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 缩略词表 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 论文发表情况 | 第72-73页 |
| 本论文感谢以下项目的资助 | 第73页 |
