| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 核苷类药物简介 | 第12-19页 |
| 1.1.1 抗病毒核苷类药物 | 第13-16页 |
| 1.1.2 抗肿瘤核苷类药物 | 第16-19页 |
| 1.2 核苷类似物合成现状 | 第19-22页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第19页 |
| 1.2.2 微生物发酵法 | 第19页 |
| 1.2.3 酶促转化合成法 | 第19-20页 |
| 1.2.4 阿糖鸟苷简介及研究现状 | 第20-21页 |
| 1.2.5 立题依据与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌种 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22页 |
| 2.1.3 仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 游离细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.2 固定化酶的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 酶的固定化方法 | 第24页 |
| 2.2.4 酶液浓度和酶活的测定 | 第24-26页 |
| 2.2.5 固定化酶酶活测定 | 第26-27页 |
| 2.2.6 反应产物ara-DA的HPLC测定及转化率计算 | 第27-28页 |
| 2.2.7 反应产物ara-G的HPLC测定及转化率计算 | 第28页 |
| 2.2.8 产物的质谱分析 | 第28-29页 |
| 2.2.9 产物的红外光谱分析 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与分析 | 第30-60页 |
| 3.1 PNPase酶的固定化条件实验 | 第30-33页 |
| 3.1.1 树脂活化过程中戊二醛适宜浓度的测定 | 第30-31页 |
| 3.1.2 戊二醛处理树脂的适宜时间的确定 | 第31页 |
| 3.1.3 PNPase酶酶联时间的选择 | 第31-32页 |
| 3.1.4 单位树脂对应酶量的确定 | 第32-33页 |
| 3.1.5 固定化PNPase酶的催化效能测定 | 第33页 |
| 3.2 用固定化PNPase酶合成ara-DA的催化条件初步优化 | 第33-39页 |
| 3.2.1 反应过程产物-时间曲线 | 第33-34页 |
| 3.2.2 缓冲液pH对ara-U转化率的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.3 反应温度对ara-U转化率的影响 | 第35页 |
| 3.2.4 KH_2PO_4浓度对ara-U转化率的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.5 固定化酶用量对ara-U转化率的影响 | 第36页 |
| 3.2.6 两种底物比例对ara-U转化率的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.7 底物浓度对ara-U转化率的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.8 最适条件下固定化PNPase酶反复使用催化效力的考察 | 第38-39页 |
| 3.3 固定化PNPase酶柱的制备及连续催化工艺条件优化 | 第39-44页 |
| 3.3.1 固定化PNPase酶柱的制备及连续反应装置 | 第39-40页 |
| 3.3.2 装柱量对对固定化PNPase酶柱催化效力的影响 | 第40页 |
| 3.3.3 底物溶液流加速度固定化PNPase酶柱催化效力的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.4 对酶柱连续反应的温度的再优化 | 第41-42页 |
| 3.3.5 对酶柱连续反应的缓冲液pH的再优化 | 第42页 |
| 3.3.6 缓冲液KH_2PO_4浓度的再优化 | 第42-43页 |
| 3.3.7 在优化工艺条件下固定化PNPase酶柱的催化效力及其可持续性能 | 第43-44页 |
| 3.3.8 产物ara-DA的质谱鉴定 | 第44页 |
| 3.4 AMPDAase酶的固定化及条件优化 | 第44-48页 |
| 3.4.1 树脂活化过程戊二醛浓度适宜浓度测定 | 第45页 |
| 3.4.2 戊二醛处理树脂的适宜时间确定 | 第45-46页 |
| 3.4.3 AMPDAase酶联时间的选择 | 第46-47页 |
| 3.4.4 单位树脂对应酶量的确定 | 第47页 |
| 3.4.5 固定化AMPDAase酶的催化效能测定 | 第47-48页 |
| 3.5 固定化AMPDAase酶合成ara-G的条件优化 | 第48-53页 |
| 3.5.1 反应温度对ara-DA转化率的影响 | 第48-49页 |
| 3.5.2 缓冲液pH对ara-DA转化率的影响 | 第49-50页 |
| 3.5.3 缓冲液浓度对ara-DA转化率的影响 | 第50页 |
| 3.5.4 底物浓度对ara-DA转化率的影响 | 第50-51页 |
| 3.5.5 固定化酶用量对ara-DA转化率的作用 | 第51-52页 |
| 3.5.6 反应过程产物-时间曲线的测定 | 第52页 |
| 3.5.7 最适条件下固定化AMPDAase酶反复使用转化效力的考察 | 第52-53页 |
| 3.6 固定化AMPDAase酶柱的制备及连续催化反应条件的优化 | 第53-58页 |
| 3.6.1 固定化PNPase酶柱的制备及连续反应装置 | 第53页 |
| 3.6.2 装柱量对固定化AMPDAase酶柱催化效果的影响 | 第53-54页 |
| 3.6.3 底物溶液流加速度对固定化AMPDAase酶柱催化效果的影响 | 第54-55页 |
| 3.6.4 连续催化反应最适温度试验 | 第55页 |
| 3.6.5 连续催化反应最适缓冲液pH实验 | 第55-56页 |
| 3.6.6 连续催化反应缓冲液浓度对ara-DA转化率影响 | 第56-57页 |
| 3.6.7 固定化AMPDAase酶柱连续反应催化效力及其可持续性能 | 第57-58页 |
| 3.7 产物ara-G的鉴定 | 第58-60页 |
| 3.7.1 HPLC法的定性验证 | 第58页 |
| 3.7.2 质谱法鉴定 | 第58-59页 |
| 3.7.3 红外光谱法鉴定 | 第59-60页 |
| 第四章 结论 | 第60-62页 |
| 4.1 固定化PNPase酶的制备条件 | 第60页 |
| 4.2 固定化PNPase酶合成ara-DA连续催化工艺条件 | 第60页 |
| 4.3 固定化AMPDAase酶的制备条件 | 第60-61页 |
| 4.4 固定化AMPDAase酶合成ara-G连续催化工艺条件 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第72-74页 |
