| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 具有立体选择性脂肪酶的应用及分离纯化 | 第15-19页 |
| 1.1.1 L2氨基丁酸的制备与研究 | 第15-16页 |
| 1.1.2 具有立体选择性脂肪酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.1.3 脂肪酶的分离纯化方法 | 第17-19页 |
| 1.2 活性探针的研究现状 | 第19-25页 |
| 1.2.1 活性探针的定义及设计 | 第19-22页 |
| 1.2.2 活性探针在水解酶中的应用 | 第22-25页 |
| 1.3 课题研究背景、内容及意义 | 第25-27页 |
| 第二章 活性探针的设计及合成 | 第27-38页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验仪器与设备 | 第27-29页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.2.3 展开剂的配制 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.3.1 化学合成部分 | 第29页 |
| 2.3.2 相关底物的合成 | 第29-30页 |
| 2.3.3 活性探针的设计及合成 | 第30-34页 |
| 2.4 化合物的表征 | 第34-37页 |
| 2.4.1 相关底物的表征 | 第34页 |
| 2.4.2 相关化合物的表征 | 第34-37页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第37页 |
| 2.6 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 立体选择性脂肪酶的分离与鉴定 | 第38-50页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-45页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-49页 |
| 3.3.1 立体选择性脂肪酶的标记、富集和纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.2 立体选择性脂肪酶的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 探针的特异性标记 | 第47-48页 |
| 3.3.4 靶标酶的立体选择性实验 | 第48-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 Aspergillus tamarii ZJUT ZQ013脂肪酶的基因克隆与表达 | 第50-63页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料 | 第50-52页 |
| 4.2.1 菌种与质粒载体 | 第50-51页 |
| 4.2.2 试剂与材料 | 第51页 |
| 4.2.3 培养基 | 第51页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第51-52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-56页 |
| 4.3.1 菌种培养 | 第52页 |
| 4.3.2 引物设计 | 第52-53页 |
| 4.3.3 总RNA的提取及检测 | 第53页 |
| 4.3.4 反转录（c DNA第一链的合成） | 第53-54页 |
| 4.3.5 目的基因的PCR扩增 | 第54-55页 |
| 4.3.6 重组表达载体pEASY-E2-est的构建及鉴定 | 第55页 |
| 4.3.7 重组质粒pEASY-E2-est的表达 | 第55-56页 |
| 4.3.8 重组菌的酶活测定 | 第56页 |
| 4.3.9 重组脂肪酶的序列分析及同源建模 | 第56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-62页 |
| 4.4.1 总RNA的提取及目的基因的PCR扩增 | 第56-57页 |
| 4.4.2 阳性重组子鉴定 | 第57-58页 |
| 4.4.3 测序鉴定 | 第58-59页 |
| 4.4.4 重组蛋白的诱导表达 | 第59-60页 |
| 4.4.5 脂肪酶的结构分析 | 第60-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 重组酶的分离纯化及其酶学性质的研究 | 第63-79页 |
| 5.1 引言 | 第63页 |
| 5.2 材料与方法 | 第63-69页 |
| 5.2.1 菌种与培养基 | 第63-64页 |
| 5.2.2 常用缓冲液 | 第64页 |
| 5.2.3 仪器 | 第64-65页 |
| 5.2.4 实验方法 | 第65-67页 |
| 5.2.5 重组酶的酶学性质研究 | 第67-69页 |
| 5.2.6 重组酶动力学常数的测定 | 第69页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第69-77页 |
| 5.3.1 重组酶的分离纯化 | 第69-70页 |
| 5.3.2 重组酶的酶学性质 | 第70-76页 |
| 5.3.3 酶反应动力学 | 第76-77页 |
| 5.4 本章小结 | 第77-79页 |
| 第六章 结论与展望 | 第79-81页 |
| 6.1 结论 | 第79-80页 |
| 6.2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 附录 | 第90-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第98页 |
