| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第6-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 木聚糖 | 第11-14页 |
| 1.1.1 半纤维素与木聚糖 | 第11-12页 |
| 1.1.2 木聚糖的酶解 | 第12-14页 |
| 1.2 木聚糖酶研究进展 | 第14-22页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的来源和生化特性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2.1 第10/11家族(GH10/11)木聚糖酶 | 第15-16页 |
| 1.2.3 木聚糖酶的催化机制 | 第16-17页 |
| 1.2.4 木聚糖酶分子的结构区域 | 第17-19页 |
| 1.2.4.1 催化区 | 第17-18页 |
| 1.2.4.2 碳水化合物结构域 | 第18页 |
| 1.2.4.3 连接区和重复序列 | 第18页 |
| 1.2.4.4 热稳定区 | 第18-19页 |
| 1.2.5 木聚糖酶的克隆与分子进化 | 第19页 |
| 1.2.6 木聚糖酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.6.1 在造纸工业上的应用 | 第19页 |
| 1.2.6.2 在食品工业上的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.6.3 在饲料工业上的应用 | 第20页 |
| 1.2.6.4 木聚糖酶在其它方面的应用 | 第20页 |
| 1.2.7 本课题选题依据及创新点 | 第20-21页 |
| 1.2.8 本课题研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 产木聚糖酶微生物的筛选、鉴定及木聚糖降解酶相关基因的克隆 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 样品 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 引物合成及DNA测序 | 第23页 |
| 2.1.5 常用溶液 | 第23页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.7 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 样品的处理及木聚糖酶产生菌的筛选 | 第25页 |
| 2.2.1.1 样品的处理 | 第25页 |
| 2.2.1.2 产酶微生物的筛选 | 第25页 |
| 2.2.1.3 产木聚糖酶菌株的确定 | 第25页 |
| 2.2.2 菌株的鉴定 | 第25-28页 |
| 2.2.2.1 形态学观察 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.2.3 16S rDNA的PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.2.4 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第27页 |
| 2.2.2.5 DNA片段的连接和转化 | 第27页 |
| 2.2.2.6 阳性重组子的筛选及DNA测序 | 第27-28页 |
| 2.2.3 木聚糖降解酶相关基因的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.3.1 细菌基因组的提取及简并引物设计 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 木聚糖降解酶相关基因部分序列的克隆 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.3.1 产木聚糖酶微生物的筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.1.1 平板初筛 | 第30页 |
| 2.3.1.2 产木聚糖酶菌株的确定 | 第30-31页 |
| 2.3.2 菌株SL3和SL4的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3.2.1 形态观察 | 第31-32页 |
| 2.3.2.2 16S rDNA序列分析 | 第32-33页 |
| 2.3.3 木聚糖降解酶相关基因部分序列的获得与分析 | 第33-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 新木聚糖酶基因全长的克隆及序列分析 | 第36-51页 |
| 3.1 实验材枓 | 第36-37页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 引物合成及DNA测序 | 第36页 |
| 3.1.4 常用溶液 | 第36页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.1.6 培养基 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 GH10木聚糖酶基因全长序列的获得 | 第37-41页 |
| 3.2.1.1 菌株SL3、SL4基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 3.2.1.2 TAIL-PCR特异性引物的设计 | 第37-38页 |
| 3.2.1.3 三轮TAIL-PCR反应的体系及程序 | 第38-40页 |
| 3.2.1.4 TAIL-PCR目标产物的回收连接和测序 | 第40-41页 |
| 3.2.2 木聚糖酶基因全长拼接及序列分析 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-50页 |
| 3.3.1 GH10木聚糖酶基因xynSL3和xynSL4全长序列的获得 | 第41-43页 |
| 3.3.1.1 GH10木聚糖酶基因xynSL3全长序列的获得 | 第41-42页 |
| 3.3.1.2 GH10木聚糖酶基因xynSL4全长序列的获得 | 第42-43页 |
| 3.3.2 GH10木聚糖酶基因xynSL3和xynSL4全长序列分析 | 第43-47页 |
| 3.3.2.1 木聚糖酶基因xynSL3全长序列分析 | 第43-45页 |
| 3.3.2.2 木聚糖酶基因xynSL4全长序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3.3 XynSL4的氨基酸序列比对、三维结构预测及系统发育分析 | 第47-50页 |
| 3.3.3.1 XynSL4的氨基酸序列比对分析 | 第47-48页 |
| 3.3.3.2 XynSL4的三维结构预测 | 第48-49页 |
| 3.3.3.3 XynSL4的系统发育分析 | 第49-50页 |
| 3.4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 新木聚糖酶的表达、纯化及性质研究 | 第51-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 引物合成及DNA测序 | 第51页 |
| 4.1.4 常用溶液 | 第51-52页 |
| 4.1.5 主要仪器设备 | 第52页 |
| 4.1.6 培养基 | 第52-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-63页 |
| 4.2.1 原核表达载体pET-xynSL4的构建 | 第53-56页 |
| 4.2.1.1 木聚糖酶基因xynSL4的克隆 | 第53页 |
| 4.2.1.2 酶切与连接 | 第53-54页 |
| 4.2.1.3 重组质粒pET-xynSL4转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第54-55页 |
| 4.2.1.4 重组酶XynSL4在大肠杆菌BL21 (DE3)中的表达 | 第55-56页 |
| 4.2.2 重组酶XynSL4的纯化 | 第56-59页 |
| 4.2.2.1 重组酶XynSL4的大量诱导和浓缩 | 第56页 |
| 4.2.2.2 重组酶XynSL4的镍柱纯化 | 第56-57页 |
| 4.2.2.3 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第57-58页 |
| 4.2.2.4 BCA法测定蛋白浓度 | 第58-59页 |
| 4.2.3 重组酶XynSL4的酶活测定 | 第59-60页 |
| 4.2.3.1 木聚糖酶的酶活测定 | 第59-60页 |
| 4.2.3.2 酶活定义单位 | 第60页 |
| 4.2.4 重组酶XynSL4的性质测定 | 第60-63页 |
| 4.2.4.1 重组酶XynSL4最适反应pH及pH稳定性测定 | 第60页 |
| 4.2.4.2 重组酶XynSL4最适反应温度及热稳定性测定 | 第60页 |
| 4.2.4.3 重组酶XynSL4在60℃下的pH稳定性 | 第60-61页 |
| 4.2.4.4 底物的存在对XynSL4在60℃下的pH稳定性的影响 | 第61页 |
| 4.2.4.5 底物的存在对XynSL4在pH 7.0下的热稳定性的影响 | 第61页 |
| 4.2.4.6 不同底物的存在对XynSL4在pH 7.0下的热稳定性的影响 | 第61页 |
| 4.2.4.7 不同金属离子及化学试剂对XynSL4的影响 | 第61页 |
| 4.2.4.8 NaCl浓度对XynSL4酶活的影响及XynSL4的盐耐受性 | 第61页 |
| 4.2.4.9 重组酶XynSL4比活的测定 | 第61-62页 |
| 4.2.4.10 重组酶XynSL4K_m值和V_(max)的测定 | 第62页 |
| 4.2.4.11 重组酶XynSL4降解木聚糖的产物分析 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-74页 |
| 4.3.1 重组酶XynSL4在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第63-64页 |
| 4.3.2 重组酶XynSL4的酶学性质研究 | 第64-74页 |
| 4.3.2.1 重组酶XynSL4的基本酶学性质 | 第64-66页 |
| 4.3.2.2 重组酶XynSL4在60℃下的pH稳定性 | 第66-67页 |
| 4.3.2.3 底物对XynSL4在60℃下pH稳定性的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.2.4 底物对XynSL4在70℃下热稳定性的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.2.5 不同底物对XynSL4在70℃下热稳定性的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.2.6 不同金属离子及化学试剂对XynSL4酶活性的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.2.7 NaCl浓度对XynSL4酶活的影响及XynSL4的盐耐受性 | 第71-72页 |
| 4.3.2.8 重组酶XynSL4K_m值V_(max)和K_(cat)的测定 | 第72-73页 |
| 4.3.2.9 重组酶XynSL4降解木聚糖的产物分析 | 第73-74页 |
| 4.4 小结 | 第74-76页 |
| 结论与展望 | 第76-78页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
