| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 引言 | 第10-24页 |
| 1.1 淀粉酶的概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 淀粉 | 第10页 |
| 1.1.2 淀粉酶 | 第10-13页 |
| 1.1.2.1 α-淀粉酶 | 第11页 |
| 1.1.2.2 β-淀粉酶 | 第11-12页 |
| 1.1.2.3 葡萄糖淀粉酶 | 第12页 |
| 1.1.2.4 异淀粉酶 | 第12页 |
| 1.1.2.5 支链淀粉酶 | 第12-13页 |
| 1.2 A-淀粉酶家族的特征及反应机制 | 第13-17页 |
| 1.2.1 α-淀粉酶家族的特征 | 第13-15页 |
| 1.2.2 催化机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 淀粉酶的结构域 | 第16-17页 |
| 1.3 淀粉酶的性质 | 第17-18页 |
| 1.4 淀粉酶酶活测定方法 | 第18-19页 |
| 1.5 淀粉酶基因的克隆与表达 | 第19-20页 |
| 1.6 淀粉酶的工业应用 | 第20-22页 |
| 1.6.1 生物乙醇及淀粉原料的深加工行业 | 第20-21页 |
| 1.6.2 洗涤剂行业 | 第21页 |
| 1.6.3 纺织行业 | 第21页 |
| 1.6.4 造纸行业 | 第21-22页 |
| 1.6.5 面包行业 | 第22页 |
| 1.7 本课题选题依据 | 第22-23页 |
| 1.8 本课题研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 产淀粉酶微生物的筛选及鉴定 | 第24-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 样品 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 引物合成及DNA测序 | 第24页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.5 常用溶液 | 第24-25页 |
| 2.1.6 培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 淀粉酶产生菌的初筛和复筛 | 第27页 |
| 2.2.1.1 淀粉酶产生菌的初筛 | 第27页 |
| 2.2.1.2 淀粉酶产生菌的复筛 | 第27页 |
| 2.2.2 淀粉酶活力测定 | 第27-29页 |
| 2.2.2.1 麦芽糖标准曲线绘制 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 酶活力测定方法 | 第28-29页 |
| 2.2.2.3 酶活力计算 | 第29页 |
| 2.2.2.4 淀粉酶酶学性质的初步研究 | 第29页 |
| 2.2.3 菌株形态学观察 | 第29-30页 |
| 2.2.4 分子生物学鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.4.1 基因组DNA提取 | 第30页 |
| 2.2.4.2 16S rDNA序列扩增 | 第30页 |
| 2.2.4.3 PCR扩增产物的回收和纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.4.4 TA克隆及连接产物转化 | 第31-32页 |
| 2.2.4.5 阳性克隆子的筛选 | 第32页 |
| 2.2.5 进化树的构建 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-41页 |
| 2.3.1 菌株的筛选 | 第33-36页 |
| 2.3.2 淀粉酶的酶学性质初步研究 | 第36-38页 |
| 2.3.3 菌株的鉴定 | 第38-41页 |
| 2.3.3.1 形态学观察 | 第38-39页 |
| 2.3.3.2 16S rDNA序列分析 | 第39-41页 |
| 2.4 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 菌株WQJ-60的产酶条件优化及酶学性质研究 | 第42-61页 |
| 3.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂和溶液 | 第42页 |
| 3.1.3 培养基 | 第42页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 菌株WQJ-60产酶培养基的优化 | 第42-44页 |
| 3.2.1.1 碳源对产酶的影响 | 第43页 |
| 3.2.1.2 氮源对产酶的影响 | 第43页 |
| 3.2.1.3 NaCl含量对产酶的影响 | 第43页 |
| 3.2.1.4 无机盐对产酶的影响 | 第43页 |
| 3.2.1.5 表面活性剂对产酶的影响 | 第43页 |
| 3.2.1.6 培养基的初始pH值对产酶的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.2 菌株WQJ-60发酵条件的优化 | 第44页 |
| 3.2.2.1 培养温度对产酶的影响 | 第44页 |
| 3.2.2.2 摇床转速对产酶的影响 | 第44页 |
| 3.2.2.3 装液量对产酶的影响 | 第44页 |
| 3.2.2.4 接种量对产酶的影响 | 第44页 |
| 3.2.2.5 菌株产酶曲线的测定 | 第44页 |
| 3.2.3 菌株WQJ-60淀粉酶酶学性质的研究 | 第44-45页 |
| 3.2.3.1 淀粉酶硫酸铵分级沉淀 | 第44-45页 |
| 3.2.3.2 pH对淀粉酶活力的影响 | 第45页 |
| 3.2.3.3 温度对淀粉酶活力的影响 | 第45页 |
| 3.2.3.4 不同金属离子及相关化学试剂对淀粉酶活力的影响 | 第45页 |
| 3.2.3.5 淀粉酶的底物特异性的测定 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-60页 |
| 3.3.1 菌株WQJ-60产酶培养基的优化 | 第45-53页 |
| 3.3.1.1 碳源对产酶的影响 | 第45-47页 |
| 3.3.1.2 氮源对产酶的影响 | 第47-49页 |
| 3.3.1.3 NaCl含量对产酶的影响 | 第49页 |
| 3.3.1.4 无机盐对产酶的影响 | 第49-51页 |
| 3.3.1.5 表面活性剂对产酶的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.1.6 培养基的初始pH值对产酶的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.2 菌株WQJ-60发酵条件的优化 | 第53-56页 |
| 3.3.2.1 培养温度对产酶的影响 | 第53页 |
| 3.3.2.2 摇床转速对产酶的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.2.3 装液量对产酶的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.2.4 接种量对产酶的影响 | 第55页 |
| 3.3.2.5 菌株产酶曲线的测定 | 第55-56页 |
| 3.3.3 菌株WQJ-60淀粉酶酶学性质的研究 | 第56-60页 |
| 3.3.3.1 淀粉酶硫酸铵分级沉淀 | 第56-57页 |
| 3.3.3.2 pH对淀粉酶活力的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.3.3 温度对淀粉酶活力的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.3.4 不同金属离子及相关化学试剂对淀粉酶活力的影响 | 第59页 |
| 3.3.3.5 淀粉酶底物特异性的测定 | 第59-60页 |
| 3.4 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 淀粉酶基因片段的克隆 | 第61-66页 |
| 4.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第61页 |
| 4.1.2 引物合成及DNA测序 | 第61页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第61页 |
| 4.1.4 常用溶液 | 第61页 |
| 4.1.5 培养基 | 第61页 |
| 4.1.6 主要仪器 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 4.2.1 淀粉水解酶简并引物的设计 | 第62页 |
| 4.2.2 淀粉水解酶基因片段的克隆 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-65页 |
| 4.3.1 淀粉水解酶基因片段的克隆 | 第63-65页 |
| 4.4 小结 | 第65-66页 |
| 第五章 菌株WQJ-1α-淀粉酶基因amyWQJ的克隆、表达及酶学性质研究 | 第66-86页 |
| 5.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第66页 |
| 5.1.2 引物合成及DNA测序 | 第66页 |
| 5.1.3 试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第66页 |
| 5.1.4 常用溶液 | 第66-67页 |
| 5.1.5 培养基 | 第67页 |
| 5.1.6 主要仪器 | 第67页 |
| 5.2 实验方法 | 第67-74页 |
| 5.2.1 α-淀粉酶基因全长序列的扩增 | 第67-68页 |
| 5.2.2 α-淀粉酶基因全长序列的分析 | 第68页 |
| 5.2.3 原核表达载体pET-28a(+)-amy WQJ的构建 | 第68-71页 |
| 5.2.3.1 α-淀粉酶基因amyWQJ的克隆 | 第68-69页 |
| 5.2.3.2 酶切与连接 | 第69-70页 |
| 5.2.3.3 重组质粒pET-28a(+)-amyWQJ的转化 | 第70页 |
| 5.2.3.4 重组酶rAmyWQJ在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第70-71页 |
| 5.2.4 重组酶rAmyWQJ的纯化 | 第71-74页 |
| 5.2.4.1 重组酶rAmyWQJ的镍柱纯化 | 第71-72页 |
| 5.2.4.2 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第72-73页 |
| 5.2.4.3 蛋白浓度的测定 | 第73-74页 |
| 5.2.5 重组酶rAmyWQJ的酶学性质研究 | 第74页 |
| 5.2.5.1 pH对重组酶rAmyWQJ酶活力的影响 | 第74页 |
| 5.2.5.2 温度对重组酶rAmyWQJ酶活力的影响 | 第74页 |
| 5.2.5.3 不同金属离子及相关化学试剂对重组酶rAmyWQJ酶活力的影响 | 第74页 |
| 5.2.5.4 重组酶rAmyWQJ的底物特异性的测定 | 第74页 |
| 5.2.5.5 重组酶rAmyWQJ的动力学常数测定 | 第74页 |
| 5.2.5.6 重组酶rAmyWQJ水解产物的硅胶板薄层层析分析法 | 第74页 |
| 5.3 结果与分析 | 第74-84页 |
| 5.3.1 α-淀粉酶基因全长序列的扩增 | 第74-75页 |
| 5.3.2 α-淀粉酶基因全长序列的分析 | 第75-76页 |
| 5.3.3 原核表达载体pET-28a(+)-amy WQJ的构建及验证 | 第76-77页 |
| 5.3.4 重组酶rAmyWQJ的纯化 | 第77-78页 |
| 5.3.5 重组酶rAmyWQJ的酶学性质研究 | 第78-84页 |
| 5.3.5.1 pH对重组酶rAmyWQJ酶活力的影响 | 第78-79页 |
| 5.3.5.2 重组酶rAmyWQJ的最适反应温度 | 第79-80页 |
| 5.3.5.3 Ca~(2+)对重组酶rAmyWQJ的热稳定性影响 | 第80-81页 |
| 5.3.5.4 不同金属离子及相关化学试剂对重组酶rAmyWQJ酶活力的影响 | 第81-82页 |
| 5.3.5.5 重组酶rAmyWQJ的底物特异性的测定 | 第82-83页 |
| 5.3.5.6 重组酶rAmyWQJ的动力学常数测定 | 第83页 |
| 5.3.5.7 重组酶rAmyWQJ水解产物的硅胶板薄层层析分析法 | 第83-84页 |
| 5.4 小结 | 第84-86页 |
| 结论与展望 | 第86-88页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94-100页 |
| 个人简历 | 第100页 |
