| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·植物病虫害的危害 | 第11-13页 |
| ·蛋白酶抑制剂研究进展 | 第13-16页 |
| ·荞麦蛋白酶抑制剂研究进展 | 第16-17页 |
| ·植物基因的克隆和表达 | 第17-20页 |
| ·荞麦胰蛋白酶抑制剂的研究现状 | 第20-22页 |
| ·目前存在的问题和研究前景 | 第22-23页 |
| ·本次研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 苦荞胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质分析 | 第25-44页 |
| 1. 材料、试剂和仪器 | 第25-26页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·试剂和仪器 | 第25-26页 |
| 2. 方法 | 第26-33页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方案 | 第26-27页 |
| ·FtTI的提取和纯化 | 第27-29页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂活性测定 | 第29-30页 |
| ·FtTI的抑制动力学参数测定 | 第30页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30页 |
| ·蛋白质含量测定采用Bradford法 | 第30页 |
| ·基质辅助飞行时间质谱分析 | 第30-31页 |
| ·氨基酸组成分析及N-端氨基酸序列测定 | 第31-32页 |
| ·FtTI的pH和热稳定性 | 第32页 |
| ·FtTI的钝化 | 第32-33页 |
| 3. 结果与分析 | 第33-41页 |
| ·FtTI的纯化 | 第33-35页 |
| ·FtTI的质谱分析 | 第35页 |
| ·FtTI的抑制动力学参数分析 | 第35-37页 |
| ·FtTI的氨基酸含量和N-端氨基酸序列测定 | 第37-38页 |
| ·FtTI的pH和热稳定性 | 第38-39页 |
| ·FtTI的钝化 | 第39-41页 |
| 4. 讨论 | 第41-44页 |
| ·FtTI的分离纯化 | 第41-42页 |
| ·FtTI的性质分析 | 第42-44页 |
| 第三章 苦荞胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的克隆表达 | 第44-74页 |
| 1. 材料、试剂和仪器 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·试剂和仪器 | 第44-45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| 2. 实验方法 | 第46-59页 |
| ·实验路线 | 第46页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的克隆 | 第46-54页 |
| ·FtTI基因全长序列的获得及其在毕赤酵母中的高效表达 | 第54-58页 |
| ·GS115-FtTI表达条件的优化 | 第58-59页 |
| ·GS115-FtTI表达产物的纯化 | 第59页 |
| ·rFtTI的抑制活力及抑制常数的测定 | 第59页 |
| 3. 结果与分析 | 第59-70页 |
| ·苦荞麦DNA和RNA的提取 | 第59-60页 |
| ·FtTI基因保守区的克隆 | 第60-61页 |
| ·FtTI基因5'末端序列的克隆 | 第61-62页 |
| ·FtTI基因3'末端序列的克隆 | 第62页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的拼接 | 第62-65页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂基因全长序列的获得 | 第65-66页 |
| ·pPIC9k-FtTI在毕赤酵母中的高效表达 | 第66页 |
| ·GS115-FtTIⅦ表达条件的优化 | 第66-69页 |
| ·rFtTI的纯化及抑制活性检测 | 第69-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-74页 |
| ·荞麦胰蛋白酶抑制剂基因研究现状 | 第70-71页 |
| ·引物设计 | 第71页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·毕赤酵母表达研究 | 第72页 |
| ·表达条件优化研究 | 第72-73页 |
| ·重组苦荞麦胰蛋白酶抑制剂诱导表达、纯化和鉴定 | 第73-74页 |
| 第四章 苦荞胰蛋白酶抑制剂的抗病虫害研究 | 第74-87页 |
| 1. 材料、试剂和仪器 | 第74-76页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·试剂和仪器 | 第75页 |
| ·培养基 | 第75-76页 |
| 2. 实验方法 | 第76-77页 |
| ·抑制植物病原真菌实验 | 第76-77页 |
| ·FtTI的抗虫性研究 | 第77页 |
| 3. 结果与分析 | 第77-85页 |
| ·FtTI的抗病原真菌效果 | 第77-81页 |
| ·FtTI纯化产物的抗虫效果 | 第81-85页 |
| 4. 讨论 | 第85-87页 |
| ·FtTI的抗植物病原真菌实验 | 第85页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂的抗虫性研究 | 第85-86页 |
| ·苦荞麦胰蛋白酶抑制剂应用前景 | 第86-87页 |
| 小结 | 第87-89页 |
| 本论文主要的创新点 | 第87页 |
| 研究展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 1.申请专利 | 第94页 |
| 2.发表论文 | 第94页 |
| 3.在审论文 | 第94-95页 |