| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-46页 |
| ·植物对逆境胁迫的响应 | 第19-35页 |
| ·植物对生物胁迫的响应 | 第19-29页 |
| ·植物抗病基因 | 第20-22页 |
| ·植物抗病相关基因 | 第22-26页 |
| ·植物抗病信号传导途径 | 第26-29页 |
| ·植物对非生物胁迫的响应 | 第29-32页 |
| ·内源性保护物质 | 第30-31页 |
| ·植物对非生物胁迫应答的信号传导途径 | 第31-32页 |
| ·逆境胁迫相关转录因子 | 第32-35页 |
| ·bZIP转录因子 | 第33页 |
| ·MYB转录因子 | 第33页 |
| ·DREB转录因子 | 第33-34页 |
| ·NAC转录因子 | 第34页 |
| ·WRKY转录因子 | 第34-35页 |
| ·丝氨酸羧肽酶基因研究进展 | 第35-39页 |
| ·丝氨酸羧肽酶结构与分布 | 第35-37页 |
| ·氨酸羧肽酶分类 | 第37页 |
| ·丝氨酸羧肽酶类蛋白 | 第37-38页 |
| ·丝氨酸羧肽酶及其类蛋白的功能 | 第38-39页 |
| ·基因功能研究方法 | 第39-42页 |
| ·原核表达系统 | 第39-40页 |
| ·酵母表达系统 | 第40-41页 |
| ·基因的遗传转化 | 第41-42页 |
| ·RNA沉默 | 第42页 |
| ·本研究目的、意义及研究路线 | 第42-46页 |
| ·本研究目的及意义 | 第42-43页 |
| ·本研究内容及总体路线 | 第43-46页 |
| 第二章 材料与方法 | 第46-76页 |
| ·试验材料 | 第46-51页 |
| ·供试材料 | 第46页 |
| ·病原菌 | 第46页 |
| ·酶、菌株与载体 | 第46-48页 |
| ·培养基及常用溶液 | 第48-50页 |
| ·试剂盒与试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50-51页 |
| ·试验方法 | 第51-76页 |
| ·植物材料的培育及处理 | 第51页 |
| ·病原菌培养及其接种方法 | 第51-52页 |
| ·ZmSCP基因的克隆与鉴定 | 第52-59页 |
| ·总RNA的提取、检测及cDNA第一链合成 | 第52-53页 |
| ·ZmSCP基因的电子克隆 | 第53页 |
| ·引物设计 | 第53页 |
| ·中间片段的RT-PCR分析 | 第53-54页 |
| ·目的片段克隆测序 | 第54-56页 |
| ·目的片段回收 | 第54页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第54-55页 |
| ·连接反应 | 第55页 |
| ·热击法进行转化 | 第55页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第55-56页 |
| ·RACE(5'RACE和3'RACE) | 第56-57页 |
| ·RACE cDNA模板合成 | 第56-57页 |
| ·RACE-PCR | 第57页 |
| ·目的片段克隆及测序 | 第57页 |
| ·cDNA全长的获得 | 第57页 |
| ·生物信息学分析 | 第57-58页 |
| ·ZmSCP基因在玉米中拷贝数分析 | 第58-59页 |
| ·米材料DNA提取 | 第58页 |
| ·探针的制备 | 第58-59页 |
| ·Southern blot | 第59页 |
| ·ZmSCP基因表达模式分析 | 第59-61页 |
| ·米材料的准备及处理 | 第59-60页 |
| ·半定量RT-PCR与荧光定量PCR | 第60-61页 |
| ·引物设计 | 第60页 |
| ·总RNA提取和cDNA第一链合成 | 第60页 |
| ·实时荧光定量PCR引物的特异性检测 | 第60页 |
| ·定量标准品的制备 | 第60页 |
| ·FQ-PCR反应及结果分析 | 第60页 |
| ·半定量RT-PCR | 第60-61页 |
| ·ZmSCP基因的原核表达及体外抑菌特性分析 | 第61-67页 |
| ·ZmSCP基因ORF的分离 | 第61页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·ZmSCP基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第63-64页 |
| ·最佳诱导时间的分析 | 第63-64页 |
| ·最佳诱导剂浓度分析 | 第64页 |
| ·最佳诱导温度分析 | 第64页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| ·融合蛋白的Western blot检测 | 第65-66页 |
| ·目的蛋白对立枯丝核菌抑菌特性分析 | 第66-67页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第67页 |
| ·目的蛋白体外抑菌特性分析 | 第67页 |
| ·ZmSCP基因的转基因研究 | 第67-76页 |
| ·植物材料准备 | 第67页 |
| ·过量表达载体构建 | 第67-69页 |
| ·ZmSCP基因ORF的分离 | 第67-68页 |
| ·酶切及连接 | 第68-69页 |
| ·农杆菌转化 | 第69-70页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第69-70页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第70页 |
| ·转化子的PCR检测 | 第70页 |
| ·农杆菌转化烟草 | 第70-71页 |
| ·转基因阳性植株的筛选 | 第71-72页 |
| ·烟草基因组DNA、RNA、蛋白质的提取 | 第71页 |
| ·转基因阳性植株的分子检测 | 第71-72页 |
| ·转基因烟草植株中防卫相关基因的表达分析 | 第72-73页 |
| ·ZmSCP转基因烟草生长状况调查 | 第73页 |
| ·ZmSCP转基因烟草植株抗病性鉴定 | 第73-75页 |
| ·烟草赤星病病原菌处理 | 第73-74页 |
| ·烟草青枯病病原菌处理 | 第74页 |
| ·米纹枯病病原菌处理 | 第74-75页 |
| ·ZmSCP转基因烟草植株叶片抗盐性测定 | 第75页 |
| ·ZmSCP转基因烟草种子抗旱性分析 | 第75页 |
| ·ZmSCP转基因烟草植株抗氧化性分析 | 第75-76页 |
| 第三章 结果与分析 | 第76-122页 |
| ·ZmSCP基因全长cDNA序列的克隆与序列分析 | 第76-89页 |
| ·丝氨酸羧肽酶基因的电子克隆 | 第76页 |
| ·玉米总RNA的提取和鉴定 | 第76-77页 |
| ·ZmSCP基因全长cDNA序列的克隆 | 第77页 |
| ·ZmSCP基因的生物信息学分析 | 第77-87页 |
| ·ZmSCP基因编码的氨基酸及其在基因组中分布情况 | 第77-80页 |
| ·不同植物的SCP基因编码的氨基酸同源性及进化树分析 | 第80-82页 |
| ·丝氨酸羧肽酶的氨基酸组成分析 | 第82-83页 |
| ·氨酸羧肽酶蛋白质的修饰位点预测 | 第83-84页 |
| ·氨酸羧肽酶蛋白质信号肽的预测 | 第84-85页 |
| ·丝氨酸羧肽酶蛋白质亚细胞定位结果预测 | 第85-86页 |
| ·丝氨酸羧肽酶保守结构域分析 | 第86-87页 |
| ·ZmSCP基因的拷贝数分析 | 第87-89页 |
| ·探针效率检测 | 第87-88页 |
| ·Southern杂交 | 第88-89页 |
| ·ZmSCP基因表达模式分析 | 第89-96页 |
| ·引物的特异性检测 | 第89-90页 |
| ·荧光定量扩增效率检测 | 第90-91页 |
| ·ZmSCP基因在逆境胁迫下的表达模式分析 | 第91-96页 |
| ·ZmSCP基因在立枯丝核菌胁迫下的表达模式分析 | 第91-92页 |
| ·ZmSCP基因在ABA胁迫下的表达模式分析 | 第92-93页 |
| ·ZmSCP基因在JA胁迫下的表达模式分析 | 第93-94页 |
| ·ZmSCP基因在低温胁迫下的表达模式分析 | 第94-95页 |
| ·ZmSCP基因在盐胁迫胁迫下的表达模式分析 | 第95-96页 |
| ·ZmSCP基因的原核表达及体外抑菌特性分析 | 第96-102页 |
| ·ZmSCP基因开放阅读框的分离 | 第96-97页 |
| ·重组表达质粒pET32a(+)-ZmSCP的构建 | 第97-99页 |
| ·pET32a(+)-ZmSCP在大肠杆菌中的诱导表达 | 第99-100页 |
| ·表达产物Western blot检测 | 第100页 |
| ·目的蛋白体外抑菌特性分析 | 第100-102页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第100-101页 |
| ·目的蛋白体外抑菌特性分析 | 第101-102页 |
| ·ZmSCP基因的转化实验 | 第102-122页 |
| ·ZmSCP基因开放阅读框的分离 | 第103页 |
| ·植物双元表达载体pCAMBIA1301-ZmSCP的构建 | 第103-105页 |
| ·ZmSCP转基因烟草植株的获得 | 第105-107页 |
| ·ZmSCP转基因烟草植株的检测 | 第107-110页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第107-108页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第108-109页 |
| ·转基因烟草表达蛋白检测 | 第109-110页 |
| ·转基因烟草植株中防卫相关基因的表达分析 | 第110-111页 |
| ·ZmSCP转基因烟草生长状况调查 | 第111-112页 |
| ·ZmSCP转基因烟草植株抗病性鉴定 | 第112-116页 |
| ·烟草赤星病病原菌处理 | 第112-114页 |
| ·烟草青枯病病原菌处理 | 第114页 |
| ·米纹枯病病原菌立枯丝核菌胁迫处理 | 第114-116页 |
| ·ZmSCP转基因烟草植株叶片抗盐性测定 | 第116-118页 |
| ·ZmSCP转基因烟草种子抗旱性分析 | 第118-119页 |
| ·ZmSCP转基因烟草抗氧化分析 | 第119-122页 |
| 第四章 讨论 | 第122-130页 |
| ·玉米ZmSCP基因的克隆 | 第122-123页 |
| ·ZmSCP基因在玉米基因组中拷贝数分析 | 第123页 |
| ·玉米ZmSCP基因对逆境胁迫的响应 | 第123-124页 |
| ·玉米ZmSCP基因表达产物的抑菌特性分析 | 第124-126页 |
| ·表达载体的选择及诱导体系优化 | 第124-125页 |
| ·表达产物纯化 | 第125-126页 |
| ·融合蛋白作用研究及应用前景 | 第126页 |
| ·转ZmSCP基因烟草与植物逆境胁迫 | 第126-130页 |
| ·转ZmSCP基因烟草启动植物防卫系统 | 第126-127页 |
| ·玉米ZmSCP基因提高转基因烟草的抗病性 | 第127页 |
| ·玉米ZmSCP基因提高转基因植株的耐盐性 | 第127-128页 |
| ·转ZmSCP基因烟草种子抗旱性提高 | 第128页 |
| ·玉米ZmSCP基因与转基因植株的抗氧化性有关 | 第128-129页 |
| ·玉米ZmSCP基因在抗病育种中的价值 | 第129-130页 |
| 第五章 总结与展望 | 第130-134页 |
| ·结论 | 第130-132页 |
| ·正在开展和拟开展的研究 | 第132-133页 |
| ·展望 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-152页 |
| 致谢 | 第152-156页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第156-157页 |
