| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌表达系统概述 | 第14-15页 |
| 1.1.1 枯草芽孢杆菌表达系统的特点 | 第14页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌表达系统的研究重点 | 第14-15页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌的天然分泌系统及分泌途径 | 第15-17页 |
| 1.3 影响外源蛋白在枯草芽孢杆菌分泌表达的关键因素 | 第17-19页 |
| 1.3.1 启动子 | 第17页 |
| 1.3.2 核糖体结合位点 | 第17-18页 |
| 1.3.3 信号肽 | 第18-19页 |
| 1.4 提高外源蛋白在枯草芽孢杆菌中分泌量的策略 | 第19-20页 |
| 1.4.1 转化方法 | 第19页 |
| 1.4.2 基因工程策略 | 第19-20页 |
| 1.5 溶解性多糖单加氧酶简介 | 第20-21页 |
| 1.5.1 溶解性多糖单加氧酶 | 第20-21页 |
| 1.5.2 溶解性多糖单加氧酶研究进展 | 第21页 |
| 1.6 N-酰基高丝氨酸内酯酶简介 | 第21-22页 |
| 1.6.1 N-酰基高丝氨酸内酯酶 | 第21-22页 |
| 1.6.2 N-酰基高丝氨酸内酯酶研究进展 | 第22页 |
| 1.7 课题背景及研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 1.7.1 课题背景 | 第22-23页 |
| 1.7.2 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 溶解性多糖单加氧酶在信号肽筛选载体中分泌表达 | 第24-43页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2.1 菌株、质粒 | 第24页 |
| 2.2.2 仪器、试剂 | 第24页 |
| 2.2.3 主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.2.4 引物合成和测序 | 第25页 |
| 2.3 试验方法 | 第25-31页 |
| 2.3.1 溶解性多糖单加氧酶表达载体构建 | 第25-27页 |
| 2.3.2 溶解性多糖单加氧酶信号肽筛选载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.3.3 含不同信号肽的重组枯草芽孢杆菌对溶解性多糖单加氧酶的分泌表达分析 | 第29-30页 |
| 2.3.4 溶解性多糖单加氧酶结合活性的测定 | 第30页 |
| 2.3.5 溶解性多糖单加氧酶的纯化及促进几丁质酶活性分析 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-41页 |
| 2.4.1 溶解性多糖单加氧酶基因和信号肽基因的克隆 | 第31-36页 |
| 2.4.2 溶解性多糖单加氧酶表达载体和信号肽筛选载体的构建 | 第36页 |
| 2.4.3 溶解性多糖单加氧酶在含不同信号肽的重组枯草芽孢杆菌的表达分析 | 第36-38页 |
| 2.4.4 溶解性多糖单加氧酶结合活性的测定 | 第38-39页 |
| 2.4.5 溶解性多糖单加氧酶的纯化及促进几丁质酶活性分析 | 第39-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 N-酰基高丝氨酸内酯酶自分泌现象的发现 | 第43-55页 |
| 3.1 前言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.2.1 菌株、质粒 | 第43页 |
| 3.2.2 仪器、试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 主要试剂配制 | 第43-44页 |
| 3.2.4 引物合成和测序 | 第44页 |
| 3.3 试验方法 | 第44-48页 |
| 3.3.1 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.2 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶分泌表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.3 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶表达载体和分泌表达载体在枯草芽孢杆菌中的分泌表达分析 | 第46-47页 |
| 3.3.4 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶在枯草芽孢杆菌表达菌株中表达时间谱及表达菌株生长曲线的绘制 | 第47页 |
| 3.3.5 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶酶活力测定 | 第47-48页 |
| 3.4 结果与分析 | 第48-54页 |
| 3.4.1 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶基因和Epr信号肽基因的克隆 | 第48-50页 |
| 3.4.2 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶表达载体和分泌表达载体的构建 | 第50页 |
| 3.4.3 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶表达载体和分泌表达载体在枯草芽孢杆菌中的分泌表达分析 | 第50-52页 |
| 3.4.4 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶在枯草芽孢杆菌表达菌株中表达时间谱及表达菌株生长曲线的绘制 | 第52-53页 |
| 3.4.5 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶酶活力测定 | 第53-54页 |
| 3.5 讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 溶解性多糖单加氧酶和N-酰基高丝氨酸内酯酶在胞内蛋白酶敲除株中的分泌表达 | 第55-67页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 菌株、质粒 | 第55页 |
| 4.2.2 仪器、试剂 | 第55-56页 |
| 4.2.3 主要试剂配制 | 第56页 |
| 4.2.4 引物合成和测序 | 第56页 |
| 4.3 试验方法 | 第56-59页 |
| 4.3.1 胞内蛋白酶敲除载体的构建 | 第56-58页 |
| 4.3.2 蛋白酶敲除菌株的制备及鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3.3 溶解性多糖单加氧酶分泌载体在蛋白酶敲除株中的表达初步分析 | 第59页 |
| 4.3.4 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶表达载体在蛋白酶敲除株中的表达初步分析 | 第59页 |
| 4.4 结果与分析 | 第59-66页 |
| 4.4.1 胞内蛋白酶敲除载体的构建 | 第59-61页 |
| 4.4.2 蛋白酶敲除株的制备与鉴定 | 第61-62页 |
| 4.4.3 溶解性多糖单加氧酶在蛋白酶敲除株中表达初步分析 | 第62-64页 |
| 4.4.4 N-酰基高丝氨酸内酯降解酶表达载体在蛋白酶敲除株中的表达初步分析 | 第64-66页 |
| 4.5 讨论 | 第66-67页 |
| 第五章 全文结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
