中文摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4页 |
一、引言 | 第8-12页 |
1 文献综述 | 第8-11页 |
1.1 UL17基因序列的特点 | 第8页 |
1.2 UL17编码蛋白的特点 | 第8-9页 |
1.3 疱疹病毒UL17蛋白的功能 | 第9-11页 |
1.3.1 DNA切割和组装 | 第9页 |
1.3.2 衣壳在细胞内的正常分布 | 第9页 |
1.3.3 UL17蛋白与UL25蛋白复合体的作用 | 第9-10页 |
1.3.4 UL17蛋白与其它蛋白的相互作用 | 第10-11页 |
2 选题目的和意义 | 第11-12页 |
二、试验研究 | 第12-36页 |
1 材料 | 第12-13页 |
1.1 试验动物 | 第12页 |
1.2 基因、载体、毒株、菌株 | 第12页 |
1.3 主要仪器设备 | 第12页 |
1.4 主要试剂 | 第12-13页 |
2 方法 | 第13-18页 |
2.1 生物信息学分析 | 第13页 |
2.2 鸭瘟病毒UL17基因克隆表达、多克隆抗体制备 | 第13-15页 |
2.2.1 引物合成和稀释 | 第13页 |
2.2.2 DPV UL17基因扩增 | 第13-14页 |
2.2.3 DPV UL17基因T克隆 | 第14页 |
2.2.4 DPV UL17基因T克隆鉴定 | 第14页 |
2.2.5 构建pET32a-UL17重组原核表达质粒 | 第14页 |
2.2.6 pET32a-UL17重组原核表达质粒的表达 | 第14页 |
2.2.7 检测重组UL17蛋白的反应原性 | 第14-15页 |
2.2.8 重组UL17蛋白的纯化 | 第15页 |
2.2.9 兔抗重组UL17蛋白多克隆抗体制备 | 第15页 |
2.2.10 鼠抗重组UL17蛋白多克隆抗体制备 | 第15页 |
2.2.11 多克隆抗体粗提纯化 | 第15页 |
2.3 鸭瘟病毒UL17基因转录及表达时相研究 | 第15-17页 |
2.3.1 引物合成及特异性验证 | 第16页 |
2.3.2 药物抑制试验确定UL17基因的类型 | 第16页 |
2.3.3 DPV UL17基因转录类型研究 | 第16-17页 |
2.3.4 DPV UL17基因表达时相研究 | 第17页 |
2.4 鸭瘟病毒UL17基因编码蛋白在DEF中的定位研究 | 第17-18页 |
2.4.1 间接免疫荧光检测DPV UL17蛋白在DEF中的分布 | 第17页 |
2.4.2 结果判定标准 | 第17-18页 |
2.5 鸭瘟病毒UL17蛋白与UL25蛋白、UL26.5蛋白的细胞共定位研究 | 第18页 |
2.5.1 双重间接免疫荧光检测DPV UL17蛋白与UL25蛋白、UL26.5蛋白的细胞共定位情况 | 第18页 |
2.5.2 结果判定标准 | 第18页 |
3 结果 | 第18-32页 |
3.1 生物信息学分析 | 第18-22页 |
3.1.1 DPV UL17基因核酸序列分析 | 第18-19页 |
3.1.2 DPV UL17蛋白的理化性质 | 第19-21页 |
3.1.3 UL17二级结构、三级结构预测 | 第21-22页 |
3.2 鸭瘟病毒UL17基因克隆表达、多克隆抗体制备 | 第22-24页 |
3.2.1 DPV UL17基因扩增 | 第22页 |
3.2.2 T克隆pMD20T-UL17鉴定 | 第22页 |
3.2.3 重组表达载体pET32a-UL17鉴定 | 第22-23页 |
3.2.4 重组UL17蛋白表达及纯化 | 第23页 |
3.2.5 重组UL17蛋白反应原性检测 | 第23页 |
3.2.6 重组蛋白多克隆抗体的制备、纯化 | 第23-24页 |
3.3 鸭瘟病毒UL17基因转录及表达时相研究 | 第24-27页 |
3.3.1 引物特异性验证 | 第24页 |
3.3.2 药物抑制试验确定UL17基因的类型 | 第24-25页 |
3.3.3 实时荧光定量PCR标准曲线 | 第25-26页 |
3.3.4 鸭瘟病毒UL17基因转录时相分析 | 第26-27页 |
3.3.5 鸭瘟病毒UL17基因表达时相分析 | 第27页 |
3.4 鸭瘟病毒UL17基因编码蛋白在DEF中的定位研究 | 第27-29页 |
3.5 鸭瘟病毒UL17蛋白与UL25蛋白、UL26.5蛋白的细胞共定位研究 | 第29-32页 |
3.5.1 UL17蛋白与UL25蛋白的共定位情况 | 第29-31页 |
3.5.2 UL17蛋白与UL26.5蛋白的细胞共定位情况 | 第31-32页 |
4 讨论 | 第32-36页 |
4.1 生物信息学分析 | 第32-33页 |
4.2 鸭瘟病毒UL17基因克隆表达、多克隆抗体制备 | 第33-34页 |
4.3 鸭瘟病毒UL17基因转录及表达时相研究 | 第34页 |
4.4 鸭瘟病毒UL17基因编码蛋白在DEF中的定位研究 | 第34-35页 |
4.5 鸭瘟病毒UL17蛋白与UL25蛋白、UL26.5蛋白的细胞共定位研究 | 第35-36页 |
三、结论 | 第36-37页 |
参考文献 | 第37-41页 |
致谢 | 第41-42页 |
作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第42页 |