| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 缩略语表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 1 植物低磷胁迫反应研究进展 | 第18-23页 |
| 1.1 在缺磷条件下植物的形态学变化 | 第18-19页 |
| 1.2 植物磷营养逆境反应的生理学机制 | 第19-21页 |
| 1.2.1 低磷诱导植物根系分泌有机酸 | 第19-20页 |
| 1.2.2 根系分泌酸性磷酸酶的活性增加 | 第20-21页 |
| 1.2.3 利用与真菌的共生来提高磷利用能力 | 第21页 |
| 1.3 植物对低磷营养胁迫的分子机制研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3.1 酸性磷酸酶 | 第22页 |
| 1.3.2 RNA酶 | 第22页 |
| 1.3.3 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 | 第22-23页 |
| 1.3.4 质膜H~+-ATPase | 第23页 |
| 2 植物磷酸盐转运蛋白基因的研究进展 | 第23-35页 |
| 2.1 高亲和磷酸盐转运蛋白的结构特征 | 第23-24页 |
| 2.2 高亲和磷酸盐转运体编码基因的表达特征和功能鉴定 | 第24-28页 |
| 2.2.1 Pht1家族基因表达特征研究进展 | 第25-26页 |
| 2.2.2 Pht1家族磷酸盐转运蛋白的功能研究进展 | 第26-28页 |
| 2.3 Pht1家族磷转运蛋白与植物中磷信号传导调控因子 | 第28-35页 |
| 2.3.1 SUMOylation对磷信号的翻译后调控 | 第28页 |
| 2.3.2 PHR1磷信号调控转录因子 | 第28-29页 |
| 2.3.3 转录因子WRKY75调控研究 | 第29页 |
| 2.3.4 ZAT6—锌指类转录因子 | 第29页 |
| 2.3.5 水稻中PHR2磷信号调控转录因子 | 第29-30页 |
| 2.3.6 OsPTF1转录因子 | 第30页 |
| 2.3.7 植物体内的Pi平衡调节机制 | 第30-31页 |
| 2.3.8 PHF1基因 | 第31-35页 |
| 第二章 水稻OsPT2与OsPT6基因信息学分析 | 第35-43页 |
| 引言 | 第35页 |
| 1 方法 | 第35-36页 |
| 1.1 OsPT2与OsPT6基因序列的分析 | 第35-36页 |
| 1.2 OsPT2与OsPT6氨基酸序列分析 | 第36页 |
| 1.3 OsPT2与OsPT6两个磷酸盐转运蛋白的跨膜拓扑模型分析 | 第36页 |
| 1.4 OsPT2和OsPT6基因启动子分析 | 第36页 |
| 1.5 OsPT2和OsPT6与Pht1家族其它磷酸盐转运蛋白的系统进化分析 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-40页 |
| 2.1 OsPT2与OsPT6结构和跨膜分析 | 第36-38页 |
| 2.2 OsPT2和OsPT6基因启动子分析 | 第38页 |
| 2.3 OsPT2和OsPT6与Pht1家族磷酸盐转运蛋白的系统进化树分析 | 第38-40页 |
| 3 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 OsPT2和OsPT6基因的表达分析 | 第43-67页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| 1 材料与方法 | 第44-59页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 1.1.2 菌株、质粒 | 第44页 |
| 1.1.3 试剂和器材 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44-59页 |
| 1.2.1 水稻材料的准备 | 第44-45页 |
| 1.2.2 植物总RNA提取 | 第45-46页 |
| 1.2.3 cDNA第一链的合成 | 第46页 |
| 1.2.4 聚合酶链式反应(PCR)扩增 | 第46页 |
| 1.2.5 植物表达载体的构建 | 第46-52页 |
| 1.2.6 水稻转基因 | 第52-54页 |
| 1.2.7 转基因苗的检测 | 第54-56页 |
| 1.2.8 含磷量测定方法 | 第56页 |
| 1.2.9 GFP融合表达载体的构建 | 第56-57页 |
| 1.2.10 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第57-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-64页 |
| 2.1 OsPT2和OsPT6基因的表达特征 | 第59-60页 |
| 2.2 OsPT2和OsPT6基因的时空表达分析 | 第60页 |
| 2.3 OsPT2和OsPT6亚细胞定位分析 | 第60-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 利用蛙卵异源表达系统分析OsPT2和OsPT6的功能特征 | 第67-77页 |
| 引言 | 第67页 |
| 1 材料和方法 | 第67-72页 |
| 1.1 材料 | 第67-68页 |
| 1.2 方法 | 第68-72页 |
| 1.2.1 利用蛙卵异源表达系统分析高亲和磷酸盐运输蛋白基因的功能特征(方法与原理参考Zhou JJ et al.,1998) | 第68-69页 |
| 1.2.2 蛙卵表达系统的构建与cRNA的体外合成 | 第69页 |
| 1.2.3 cRNA的体外合成 | 第69-70页 |
| 1.2.4 蛙卵的获得 | 第70-71页 |
| 1.2.5 cRNA的微注射 | 第71-72页 |
| 1.2.6 验证 | 第72页 |
| 1.3 蛙卵中磷吸收量的测定 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-73页 |
| 2.1 通过蛙卵中磷含量和蛙卵膜电位的变化分析OsPT2的功能 | 第72-73页 |
| 2.2 通过蛙卵中磷含量和蛙卵膜电位的变化分析OsPT6的功能 | 第73页 |
| 3 讨论 | 第73-77页 |
| 第五章 利用OsPT6基因超表达材料分析OsPT6的功能特征 | 第77-85页 |
| 引言 | 第77-78页 |
| 1 材料和方法 | 第78-81页 |
| 1.1 材料 | 第78页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第78页 |
| 1.1.2 菌株、质粒 | 第78页 |
| 1.1.3 生物试剂 | 第78页 |
| 1.2 方法 | 第78-81页 |
| 1.2.1 OsPT6基因增强载体的构建 | 第78页 |
| 1.2.2 水稻转基因方法 | 第78页 |
| 1.2.3 潮霉素筛选 | 第78-79页 |
| 1.2.4 T_0代苗进行处理 | 第79页 |
| 1.2.5 T_0代转基因水稻的半定量RT-PCR检测 | 第79页 |
| 1.2.6 植物总RNA的提取 | 第79页 |
| 1.2.7 逆转录及半定量RT-PCR | 第79页 |
| 1.2.8 植物有效磷的测定(Nanamoriet al.,2004) | 第79-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-82页 |
| 2.1 OsPT6基因超表达转基因株系的鉴定 | 第81页 |
| 2.2 OsPT6基因超表达株系正常磷处理30天的表型分析及有效磷含量的测定 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-85页 |
| 第六章 水稻OsPT6基因启动子中缺磷响应元件的分析 | 第85-93页 |
| 引言 | 第85页 |
| 1 材料与方法 | 第85-87页 |
| 1.1 材料 | 第85-86页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第85页 |
| 1.1.2 菌株、质粒 | 第85-86页 |
| 1.2 方法 | 第86-87页 |
| 1.2.1 OsPT6基因启动子不同功能片段载体的构建 | 第86页 |
| 1.2.2 提取水稻基因组DNA(小量) | 第86页 |
| 1.2.3 水稻基因组DNA提取(大量) | 第86页 |
| 1.2.4 水稻转基因 | 第86页 |
| 1.2.5 潮霉素筛选 | 第86页 |
| 1.2.6 OsPT6基因不同长度的启动子对磷信号的响应情况 | 第86-87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-89页 |
| 2.1 启动子结构分析 | 第87-88页 |
| 2.2 启动子不同片段对OsPT6基因受低磷诱导表达的影响 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-93页 |
| 第七章 结论与展望 | 第93-95页 |
| 1 结论 | 第93-94页 |
| 2 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-109页 |
| 创新点 | 第109-111页 |
| 附录 | 第111-117页 |
| 研究生期间发表论文 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
