| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第7-8页 |
| 一、材料与方法 | 第8-23页 |
| 1.1 实验材料 | 第8-11页 |
| 1.1.1 菌株与载体 | 第8页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第8页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第8-10页 |
| 1.1.4 主要溶液和培养基及其配制 | 第10-11页 |
| 1.2 实验方法 | 第11-23页 |
| 1.2.1 荧光假单胞菌GcM5-1A基因组的提取 | 第11-12页 |
| 1.2.2 溶血素基因的扩增 | 第12-13页 |
| 1.2.3 扩增产物回收 | 第13页 |
| 1.2.4 溶血素基因与中间载体重组 | 第13-14页 |
| 1.2.5 大肠杆菌DH5α感受态的制备和质粒的转化 | 第14-15页 |
| 1.2.6 重组质粒的提取 | 第15页 |
| 1.2.7 重组质粒的PCR验证及双酶切鉴证 | 第15-16页 |
| 1.2.8 PCR产物的序列分析 | 第16页 |
| 1.2.9 构建表达载体pET-15b-Hly | 第16-18页 |
| 1.2.10 构建表达溶血素工程菌 | 第18页 |
| 1.2.11 荧光假单胞菌GcM5-1A溶血素基因在工程菌中的诱导表达 | 第18-19页 |
| 1.2.12 重组蛋白的分离纯化 | 第19页 |
| 1.2.13 溶血素Hly溶血活性检测 | 第19-20页 |
| 1.2.14 聚乙二醇对溶血素溶血活性的影响 | 第20页 |
| 1.2.15 不同浓度的二价金属离子对重组溶血素溶血活性的影响 | 第20-21页 |
| 1.2.16 溶血素经沸水浴处理后的溶血活性 | 第21页 |
| 1.2.17 EDTA、PMSF对溶血素溶血活性的影响 | 第21-22页 |
| 1.2.18 溶血素Hly对黑松幼苗的毒性检测 | 第22页 |
| 1.2.19 溶血素Hly对黑松愈伤组织细胞的毒性检测 | 第22-23页 |
| 二、结果与分析 | 第23-37页 |
| 2.1 实验结果 | 第23-36页 |
| 2.1.1 荧光假单胞菌GcM5-1A基因组提取 | 第23页 |
| 2.1.2 溶血素基因PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.1.3 重组质粒的PCR和双酶切验证 | 第24-26页 |
| 2.1.4 序列分析 | 第26-27页 |
| 2.1.5 重组表达载体的双酶切验证 | 第27-28页 |
| 2.1.6 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第28-29页 |
| 2.1.7 溶血素Hly溶血活性 | 第29-30页 |
| 2.1.8 聚乙二醇对溶血素溶血活性的影响 | 第30-31页 |
| 2.1.9 不同浓度的二价金属离子对重组溶血素溶血活性的影响 | 第31-32页 |
| 2.1.10 溶血素经沸水浴处理后的溶血活性 | 第32页 |
| 2.1.11 EDTA及PMSF对溶血素溶血活性的影响 | 第32-33页 |
| 2.1.12 溶血素Hly对黑松幼苗的毒性 | 第33-34页 |
| 2.1.13 溶血素Hly对黑松愈伤组织细胞的毒性 | 第34-36页 |
| 2.2 结果分析 | 第36-37页 |
| 三、全文讨论与结论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 综述 | 第41-57页 |
| 1.松材线虫病简介 | 第41页 |
| 2.松材线虫病致病机理假说 | 第41-48页 |
| 2.1 单一病原假说 | 第41-44页 |
| 2.1.1 松材线虫分泌的纤维素酶对松萎蔫病的影响 | 第42页 |
| 2.1.2 松材线虫侵染后宿主应激反应对松萎蔫病的影响 | 第42-44页 |
| 2.2 松材线虫与其相关细菌复合侵染假说 | 第44-48页 |
| 2.2.1 细菌参与到松萎蔫病的发展 | 第45-46页 |
| 2.2.2 细菌在松萎蔫病发展中的作用 | 第46-48页 |
| 结语 | 第48-50页 |
| 综述参考文献 | 第50-57页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
