| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-32页 |
| 第一节 木聚糖酶系的多态性及协同作用 | 第9-10页 |
| 第二节 木聚糖酶的分类 | 第10-11页 |
| 第三节 木聚糖酶的结构 | 第11-15页 |
| 第四节 木聚糖酶特性 | 第15-17页 |
| 4.1 碳水化合物含量 | 第15-16页 |
| 4.2 底物特异性 | 第16-17页 |
| 第五节 木聚糖酶的作用机理 | 第17-19页 |
| 第六节 影响木聚糖酶产量的因素 | 第19-23页 |
| 第七节 木聚糖酶基因的克隆和表达 | 第23-27页 |
| 7.1 大肠杆菌表达 | 第23-25页 |
| 7.2 酵母表达 | 第25-27页 |
| 第八节 木聚糖酶的应用 | 第27-31页 |
| 8.1 木聚糖酶在饲料工业中应用 | 第27-29页 |
| 8.2 木聚糖酶在造纸和制浆工业中应用 | 第29-30页 |
| 8.3 木聚糖酶在食品工业中应用 | 第30-31页 |
| 8.4 木聚糖酶在其它领域中应用 | 第31页 |
| 第九节 研究目的 | 第31-32页 |
| 第二章 黑曲霉F26木聚糖酶cDNA的亚克隆和在酵母中表达 | 第32-47页 |
| 1 策略 | 第32-34页 |
| 1.1 亚克隆策略 | 第32-33页 |
| 1.2 表达策略 | 第33-34页 |
| 2 实验材料 | 第34-36页 |
| 3 实验方法 | 第36-43页 |
| 3.1 木聚糖酶cDNA的亚克隆 | 第36-40页 |
| 3.1.1 pGEM-T easy ANX Vector质粒抽提 | 第36-37页 |
| 3.1.2 木聚糖酶cDNA的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.3 PCR产物电泳 | 第38页 |
| 3.1.4 PCR产物清洁 | 第38页 |
| 3.1.5 cDNA片段与pGEM-T easy Vector的连接 | 第38-39页 |
| 3.1.6 TOP 10F’感受态细胞的制备与转化 | 第39页 |
| 3.1.7 菌落PCR鉴定与质粒提取 | 第39-40页 |
| 3.2 木聚糖酶cDNA的表达 | 第40-43页 |
| 3.2.1 木聚糖酶cDNA与表达载体pPIC9K的连接 | 第40页 |
| 3.2.2 TOP 10F’感受态细胞的制备与转化 | 第40页 |
| 3.2.3 菌落PCR鉴定与质粒大量提取 | 第40-42页 |
| 3.2.4 重组表达质粒pPIC9K-ANXE的线性化及纯化 | 第42页 |
| 3.2.5 酵母感受态制备、转化及重组子筛选 | 第42-43页 |
| 4 实验结果 | 第43-47页 |
| 4.1 木聚糖酶cDNA的PCR扩增 | 第43页 |
| 4.2 亚克隆阳性克隆子pGEM-T easy ANXE的筛选与鉴定 | 第43-44页 |
| 4.3 重组质粒ANXE和表达质粒pPIC9K的双酶切 | 第44-45页 |
| 4.4 目的cDNA与表达载体的连接及阳性重组子pPIC9K-ANXE的筛选鉴定 | 第45页 |
| 4.5 重组表达质粒pPIC9K-ANXE的大量提取及线性化 | 第45页 |
| 4.6 线性化质粒pPIC9K-ANXE的转导及阳性表达子的筛选 | 第45-47页 |
| 第三章 褐色高温单孢菌TF木聚糖酶基因的亚克隆和在酵母中表达 | 第47-56页 |
| 1 策略 | 第47-49页 |
| 1.1 亚克隆策略 | 第47-48页 |
| 1.2 表达策略 | 第48-49页 |
| 2 实验材料 | 第49页 |
| 3 实验方法 | 第49-52页 |
| 3.1 木聚糖酶基因TFX的亚克隆 | 第49-50页 |
| 3.1.1 pGEM-T easy TFX Vector质粒抽提 | 第49页 |
| 3.1.2 木聚糖酶TFX基因的PCR扩增 | 第49-50页 |
| 3.1.3 PCR产物电泳 | 第50页 |
| 3.1.4 PCR产物清洁 | 第50页 |
| 3.1.5 DNA片段与pGEM-T easy Vector的连接 | 第50页 |
| 3.1.6 TOP 10F’感受态细胞的制备与转化 | 第50页 |
| 3.1.7 菌落PCR鉴定与质粒提取 | 第50页 |
| 3.2 木聚糖酶TFX基因的表达 | 第50-52页 |
| 3.2.1 木聚糖酶TFX基因与表达载体的连接 | 第50-51页 |
| 3.2.2 TOP 10F’感受态细胞的制备与转化 | 第51页 |
| 3.2.3 菌落PCR鉴定与质粒大量提取 | 第51页 |
| 3.2.4 重组表达质粒pPIC9K-TFXE的线性化及纯化 | 第51页 |
| 3.2.5 酵母感受态制备、转化及重组子筛选 | 第51-52页 |
| 4 实验结果 | 第52-56页 |
| 4.1 木聚糖酶TFX基因的PCR扩增 | 第52页 |
| 4.2 亚克隆阳性子pGEM-T Easy TFXE的筛选与鉴定 | 第52-53页 |
| 4.3 重组质粒TFXE和表达质粒pPIC9K的双酶切 | 第53-54页 |
| 4.4 目的片段与表达载体的连接及阳性克隆子pPIC9K-TFXE的筛选鉴定 | 第54页 |
| 4.5 重组表达质粒pPIC9K-TFXE的大量提取及线性化 | 第54页 |
| 4.6 线性化质粒pPIC9K-TFXE的转导及阳性表达子的筛选 | 第54-56页 |
| 第四章 重组毕赤酵母木聚糖酶的酶学特性 | 第56-65页 |
| 1 实验材料 | 第56-58页 |
| 2 培养基和培养方法 | 第58页 |
| 3 分析方法 | 第58-60页 |
| 3.1 β-1，4-内切木聚糖酶活力单位定义 | 第58页 |
| 3.2 β-1，4-内切木聚糖酶活性测定方法 | 第58页 |
| 3.3 标准曲线制作 | 第58-59页 |
| 3.4 木聚糖酶特性分析 | 第59页 |
| 3.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第59-60页 |
| 4 试验结果 | 第60-65页 |
| 4.1 pH对9KANXE01和9KTFXE木聚糖酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 4.2 温度对9KANXE01和9KTFXE木聚糖酶活性的影响 | 第61页 |
| 4.3 9KANXE01和9KTFXE木聚糖酶热稳定性 | 第61-62页 |
| 4.4 9KANXE01和9KTFXE木聚糖酶的SDS-PAGE电泳 | 第62-65页 |
| 第五章 结果分析讨论 | 第65-69页 |
| 第六章 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-83页 |
| 英文摘要 | 第83页 |
| 附录 | 第85-87页 |
