| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 细胞体外培养 | 第12-14页 |
| 1.1.1 细胞培养的发展 | 第12-13页 |
| 1.1.2 细胞培养体系的建立 | 第13-14页 |
| 1.2 胚胎干细胞及胚胎细胞系 | 第14-18页 |
| 1.2.1 胚胎干细胞的研究现状 | 第14-16页 |
| 1.2.2 胚胎细胞系的研究与应用 | 第16-18页 |
| 1.3 动物体色及色素细胞研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 动物体色 | 第18页 |
| 1.3.2 色素细胞和色素细胞发育调控 | 第18-20页 |
| 1.3.3 色素细胞的体外培养和分化 | 第20-21页 |
| 1.4 本文研究内容及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1 实验鱼 | 第22页 |
| 2.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.3 鱼血清的制备 | 第22-23页 |
| 2.4 斑马鱼胚胎提取液的制备 | 第23-24页 |
| 2.5 斑马鱼胚胎细胞培养液 | 第24-25页 |
| 第三章 实验方法 | 第25-32页 |
| 3.1 斑马鱼的催产 | 第25页 |
| 3.2 斑马鱼胚胎细胞的原代培养及传代冻存和复苏 | 第25-26页 |
| 3.3 斑马鱼胚胎细胞体外分化产生黑色素样细胞的培养 | 第26页 |
| 3.4 斑马鱼黑色素样细胞相关基因mitfa和tyr的cDNA克隆 | 第26-30页 |
| 3.4.1 引物设计 | 第26-27页 |
| 3.4.2 鱼血清条件下的斑马鱼胚胎细胞总RNA的提取 | 第27页 |
| 3.4.3 cDNA第一链的合成 | 第27-28页 |
| 3.4.4 mitfa和tyr mRNA检测 | 第28-29页 |
| 3.4.5 PCR产物的回收 | 第29页 |
| 3.4.6 连接转化 | 第29-30页 |
| 3.4.7 阳性克隆的筛选 | 第30页 |
| 3.5 鱼血清培养体系下斑马鱼胚胎细胞的多能性鉴定 | 第30-32页 |
| 第四章 实验结果 | 第32-44页 |
| 4.1 斑马鱼胚胎细胞的体外培养 | 第32-34页 |
| 4.1.1 斑马鱼胚胎细胞的原代和继代培养 | 第32-33页 |
| 4.1.2 不同培养体系下斑马鱼胚胎细胞的体外培养 | 第33页 |
| 4.1.3 有无鱼血清对斑马鱼胚胎细胞分化的影响 | 第33-34页 |
| 4.2 鱼血清条件下产生的黑色素样细胞的显微观察 | 第34-37页 |
| 4.2.1 鱼血清条件下黑色素样细胞的形态观察 | 第34-36页 |
| 4.2.2 鱼血清条件下黑色素样细胞的传代 | 第36-37页 |
| 4.3 鱼血清培养条件下胚胎细胞的mitfa和tyr基因表达分析 | 第37-41页 |
| 4.3.1 斑马鱼黑色素样细胞相关基因mitfa和tyr的cDNA克隆 | 第37-38页 |
| 4.3.2 斑马鱼黑色素样细胞相关基因mitfa和tyr的mRNA检测 | 第38-39页 |
| 4.3.3 黑色素前体细胞标记基因mitfa的鉴定 | 第39-41页 |
| 4.3.4 黑色素细胞标记基因tyr的鉴定 | 第41页 |
| 4.4 鱼血清培养体系下斑马鱼胚胎细胞的多能性鉴定 | 第41-44页 |
| 第五章 实验讨论 | 第44-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 硕士学习期间发表论文情况 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
