| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 课题的提出 | 第11页 |
| 1.2 研究进展 | 第11-19页 |
| 1.2.1 无核育种研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1.1 雄性不育 | 第12-14页 |
| 1.2.1.2 雌性不育 | 第14页 |
| 1.2.1.3 自交不亲和 | 第14-15页 |
| 1.2.1.4 外界环境 | 第15页 |
| 1.2.2 雄性不育相关基因研究 | 第15-17页 |
| 1.2.3 MSLP基因相关研究 | 第17-18页 |
| 1.2.4 转基因技术与无核育种 | 第18-19页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2.材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 载体构建 | 第20-26页 |
| 2.1.1 超表达载体构建 | 第20-25页 |
| 2.1.1.1‘黔阳无核’和‘鄂柑一号’椪柑花RNA的提取 | 第20页 |
| 2.1.1.2 反转录反应 | 第20-21页 |
| 2.1.1.3 PCR扩增目的条带 | 第21-22页 |
| 2.1.1.4 纯化回收PCR产物并与T载连接 | 第22-23页 |
| 2.1.1.5 大肠杆菌转化及质粒提取 | 第23页 |
| 2.1.1.6 双酶切反应 | 第23-24页 |
| 2.1.1.7 农杆菌转化 | 第24-25页 |
| 2.1.2 干涉载体构建 | 第25-26页 |
| 2.2 根癌农杆菌介导转化洋葱表皮细胞 | 第26-27页 |
| 2.3 酵母双杂交 | 第27-30页 |
| 2.3.1 小量法快速转化酵母 | 第27-28页 |
| 2.3.2 重组BD载体自激活实验 | 第28页 |
| 2.3.3 毒性检测 | 第28页 |
| 2.3.4 文库质粒大规模转化 | 第28-29页 |
| 2.3.5 Mating方法 | 第29-30页 |
| 2.4 野生型烟草超表达 | 第30-32页 |
| 2.4.1 叶盘法转化烟草 | 第30-31页 |
| 2.4.2 抗性烟草植株移栽 | 第31页 |
| 2.4.3 抗性植株阳性检测 | 第31-32页 |
| 2.5 山金柑干涉转化 | 第32-34页 |
| 2.5.1 转化材料 | 第32页 |
| 2.5.2 根癌农杆菌介导的山金柑遗传转化 | 第32-34页 |
| 3.结果与分析 | 第34-47页 |
| 3.1 载体构建 | 第34-36页 |
| 3.2 PBI121-MSLP-GFP的亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 3.3 酵母双杂交结果分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 自激活验证 | 第37-38页 |
| 3.3.2 毒性检测 | 第38页 |
| 3.3.3 Mating结果初步分析 | 第38-39页 |
| 3.4 转基因烟草的超表达 | 第39-44页 |
| 3.4.1 根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第39-40页 |
| 3.4.2 转基因烟草阳性检测 | 第40-41页 |
| 3.4.3 转基因烟草初步性状观察 | 第41-44页 |
| 3.4.3.1 转基因花外观形态 | 第41-42页 |
| 3.4.3.2 染色实验 | 第42-43页 |
| 3.4.3.4 显微镜下花粉形态观察 | 第43-44页 |
| 3.5 农杆菌介导的山金柑上胚轴转化 | 第44-47页 |
| 3.5.1 山金柑上胚轴转化 | 第44-45页 |
| 3.5.2 转基因山金柑初步鉴定 | 第45-46页 |
| 3.5.3 转基因山金柑表型初步分析 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 4.1 酵母双杂交结论探讨 | 第47-48页 |
| 4.2 MSLP基因可能与柑橘花粉外壁发育相关 | 第48页 |
| 4.3 MSLP在柑橘中可能与蜡质合成相关 | 第48-49页 |
| 4.4 后期研究计划 | 第49-51页 |
| 4.4.1 酵母双杂交互作基因阳性验证 | 第49-50页 |
| 4.4.2 转基因阳性烟草表型进一步鉴定 | 第50页 |
| 4.4.3 转基因山金柑植株后期表型鉴定 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附表Ⅰ 各PCR反应扩增引物 | 第59-60页 |
| 附表Ⅱ MSLP两转录本序列 | 第60-61页 |
| 附表Ⅲ Mating序列原始信息 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63页 |