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猪CD16及其介导PRRSV抗体依赖性增强作用研究

摘要第5-6页
Abstract第6页
英文缩略表第12-13页
第一章 引言第13-21页
    1.1 猪繁殖与呼吸综合征概况第13-16页
        1.1.1 病原学和分子生物学第13-14页
        1.1.2 临床症状第14页
        1.1.3 发病机制第14-15页
        1.1.4 PRRS疫苗的发展及目前存在的问题第15-16页
    1.2 抗体依赖增强作用(ADE)的研究概况第16-17页
        1.2.1 ADE的机理研究第16-17页
        1.2.2 ADE带来的问题第17页
        1.2.3 PRRSV的ADE研究第17页
    1.3 IGG FC受体概况第17-20页
        1.3.1 FcγRⅠ(CD64)第18-19页
        1.3.2 FcγRⅡ(CD32)第19页
        1.3.3 FcγRⅢ(CD16)第19-20页
    1.4 研究的目的和意义第20-21页
第二章 CD16多克隆抗体的制备及其真核表达质粒的构建第21-27页
    2.1 材料和方法第21-23页
        2.1.1 载体、感受态、细胞与实验动物第21页
        2.1.2 主要试剂第21页
        2.1.3 猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的分离第21页
        2.1.4 pET-30a/CD16原核表达质粒的构建第21-22页
        2.1.5 pcDNA3.1/CD16与pcDNA3.1/FcR γ 真核表达质粒的构建第22页
        2.1.6 重组质粒的诱导表达及蛋白的纯化第22-23页
        2.1.7 多克隆抗体的制备第23页
        2.1.8 Western-blotting第23页
    2.2 结果第23-25页
        2.2.1 原核表达质粒pET-30a/CD16的构建及鉴定第23-24页
        2.2.2 真核表达质粒pcDNA3.1/CD16、pcDNA3.1/FcR γ 的构建及鉴定第24页
        2.2.3 重组蛋白的诱导表达及纯化第24-25页
        2.2.4 CD16多克隆抗体的验证第25页
    2.3 讨论第25-27页
第三章 PRRSV的ADE第27-32页
    3.1 材料和方法第27-29页
        3.1.1 实验毒株与细胞第27页
        3.1.2 主要试剂第27页
        3.1.3 PRRSV免疫血清第27页
        3.1.4 PAMs上检测PRRSV的ADE第27页
        3.1.5 CD16单克隆抗体抑制PRRSV的ADE第27-28页
        3.1.6 相对荧光定量PCR第28页
        3.1.7 流式细胞术第28-29页
        3.1.8 数据分析第29页
    3.2 结果第29-31页
        3.2.1 PRRSV的免疫血清增强PRRSV在PAMs上的感染第29-30页
        3.2.2 抗体阻断CD16可抑制PRRSV的ADE效应第30-31页
    3.3 讨论第31-32页
第四章 PRRSV的ADE的机理研究第32-38页
    4.1 材料和方法第32-33页
        4.1.1 细胞和质粒第32页
        4.1.2 主要试剂第32页
        4.1.3 CD16在COS-7 和HEK293-T细胞上的表达第32页
        4.1.4 PRRSV免疫复合物感染表达CD16的COS-7 和HEK293-T细胞第32页
        4.1.5 激光共聚焦技术检测细胞内的PRRSV第32-33页
        4.1.6 间接免疫荧光实验第33页
        4.1.7 蚀斑形成实验第33页
    4.2 结果第33-36页
        4.2.1 CD16能介导PRRSV免疫复合物的吸附第33-34页
        4.2.2 CD16能介导PRRSV免疫复合物的内化第34-35页
        4.2.3 PRRSV在表达CD16的COS-7 细胞上的复制与释放第35-36页
    4.3 讨论第36-38页
第五章全文结论第38-39页
参考文献第39-46页
致谢第46-47页
作者简历第47页

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