摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6页 |
英文缩略表 | 第12-13页 |
第一章 引言 | 第13-21页 |
1.1 猪繁殖与呼吸综合征概况 | 第13-16页 |
1.1.1 病原学和分子生物学 | 第13-14页 |
1.1.2 临床症状 | 第14页 |
1.1.3 发病机制 | 第14-15页 |
1.1.4 PRRS疫苗的发展及目前存在的问题 | 第15-16页 |
1.2 抗体依赖增强作用(ADE)的研究概况 | 第16-17页 |
1.2.1 ADE的机理研究 | 第16-17页 |
1.2.2 ADE带来的问题 | 第17页 |
1.2.3 PRRSV的ADE研究 | 第17页 |
1.3 IGG FC受体概况 | 第17-20页 |
1.3.1 FcγRⅠ(CD64) | 第18-19页 |
1.3.2 FcγRⅡ(CD32) | 第19页 |
1.3.3 FcγRⅢ(CD16) | 第19-20页 |
1.4 研究的目的和意义 | 第20-21页 |
第二章 CD16多克隆抗体的制备及其真核表达质粒的构建 | 第21-27页 |
2.1 材料和方法 | 第21-23页 |
2.1.1 载体、感受态、细胞与实验动物 | 第21页 |
2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
2.1.3 猪肺泡巨噬细胞(PAMs)的分离 | 第21页 |
2.1.4 pET-30a/CD16原核表达质粒的构建 | 第21-22页 |
2.1.5 pcDNA3.1/CD16与pcDNA3.1/FcR γ 真核表达质粒的构建 | 第22页 |
2.1.6 重组质粒的诱导表达及蛋白的纯化 | 第22-23页 |
2.1.7 多克隆抗体的制备 | 第23页 |
2.1.8 Western-blotting | 第23页 |
2.2 结果 | 第23-25页 |
2.2.1 原核表达质粒pET-30a/CD16的构建及鉴定 | 第23-24页 |
2.2.2 真核表达质粒pcDNA3.1/CD16、pcDNA3.1/FcR γ 的构建及鉴定 | 第24页 |
2.2.3 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第24-25页 |
2.2.4 CD16多克隆抗体的验证 | 第25页 |
2.3 讨论 | 第25-27页 |
第三章 PRRSV的ADE | 第27-32页 |
3.1 材料和方法 | 第27-29页 |
3.1.1 实验毒株与细胞 | 第27页 |
3.1.2 主要试剂 | 第27页 |
3.1.3 PRRSV免疫血清 | 第27页 |
3.1.4 PAMs上检测PRRSV的ADE | 第27页 |
3.1.5 CD16单克隆抗体抑制PRRSV的ADE | 第27-28页 |
3.1.6 相对荧光定量PCR | 第28页 |
3.1.7 流式细胞术 | 第28-29页 |
3.1.8 数据分析 | 第29页 |
3.2 结果 | 第29-31页 |
3.2.1 PRRSV的免疫血清增强PRRSV在PAMs上的感染 | 第29-30页 |
3.2.2 抗体阻断CD16可抑制PRRSV的ADE效应 | 第30-31页 |
3.3 讨论 | 第31-32页 |
第四章 PRRSV的ADE的机理研究 | 第32-38页 |
4.1 材料和方法 | 第32-33页 |
4.1.1 细胞和质粒 | 第32页 |
4.1.2 主要试剂 | 第32页 |
4.1.3 CD16在COS-7 和HEK293-T细胞上的表达 | 第32页 |
4.1.4 PRRSV免疫复合物感染表达CD16的COS-7 和HEK293-T细胞 | 第32页 |
4.1.5 激光共聚焦技术检测细胞内的PRRSV | 第32-33页 |
4.1.6 间接免疫荧光实验 | 第33页 |
4.1.7 蚀斑形成实验 | 第33页 |
4.2 结果 | 第33-36页 |
4.2.1 CD16能介导PRRSV免疫复合物的吸附 | 第33-34页 |
4.2.2 CD16能介导PRRSV免疫复合物的内化 | 第34-35页 |
4.2.3 PRRSV在表达CD16的COS-7 细胞上的复制与释放 | 第35-36页 |
4.3 讨论 | 第36-38页 |
第五章全文结论 | 第38-39页 |
参考文献 | 第39-46页 |
致谢 | 第46-47页 |
作者简历 | 第47页 |