| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 原生质体瞬时表达系统的研究简史 | 第10-11页 |
| 1.1.1 原生质体在植物细胞生理生化特性中的研究 | 第10页 |
| 1.1.2 原生质体瞬时转化方法的研究 | 第10页 |
| 1.1.3 原生质体筛选基因表达调控中的启动子 | 第10-11页 |
| 1.1.4 原生质体在蛋白翻译水平的研究 | 第11页 |
| 1.2 叶肉细胞原生质体瞬时表达系统的优劣性 | 第11-12页 |
| 1.3 原生质体在玉米中的应用 | 第12-14页 |
| 1.3.1 玉米叶肉细胞原生质体的应用 | 第12-13页 |
| 1.3.2 玉米愈伤组织再生原生质体在玉米转基因中的应用 | 第13-14页 |
| 1.4 sRNAs介导基因沉默 | 第14-17页 |
| 1.4.1 sRNAs简介 | 第14-15页 |
| 1.4.2 miRNA与siRNA | 第15-16页 |
| 1.4.3 amiRNA技术 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 3.1.1 植物材料与培养条件 | 第19-20页 |
| 3.1.2 培养植物所需要注意到的事项 | 第20页 |
| 3.2 主要生化试剂和仪器 | 第20页 |
| 3.3 常用溶液配方 | 第20页 |
| 3.4 实验步骤 | 第20-22页 |
| 3.4.1 原生质体分离(所用溶液都见附录B) | 第20页 |
| 3.4.2 原生质体的收集 | 第20-21页 |
| 3.4.3 显微镜观察和计数 | 第21页 |
| 3.4.4 PEG转染 | 第21-22页 |
| 3.4.5 原生质体的培养 | 第22页 |
| 3.5 ZmMYC2-2 的克隆 | 第22-25页 |
| 3.5.1 玉米B73的DNA提取（CTAB法） | 第22-23页 |
| 3.5.2 ZmMYC2-2 的PCR扩增及质粒构建 | 第23-25页 |
| 3.6 ZmMYC2-2 的amiRNA克隆 | 第25-28页 |
| 3.6.1 用WMD网站设计Zm MYC2的amiRNA | 第25页 |
| 3.6.2 在候选amiRNA的列表中选择amiRNA | 第25-26页 |
| 3.6.3 Overlapping-PCR方法克隆amiRNA | 第26-28页 |
| 3.7 Q-RT-PCR鉴定表达量 | 第28-32页 |
| 3.8 高效液相色谱检测激素和次生代谢物的含量 | 第32-33页 |
| 4 结论与讨论 | 第33-46页 |
| 4.1 亚细胞定位分析 | 第33页 |
| 4.2 过表达ZmMYC2-2 后相关基因在转录水平的表达分析 | 第33-38页 |
| 4.3 过表达ZmMYC2-2 后丁布类抗虫次生代谢物的含量测定 | 第38-39页 |
| 4.4 amiRNA对ZmMYC2-2 的沉默效率分析 | 第39-45页 |
| 4.5 全文总结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-56页 |
| 附录A 主要生化试剂和仪器 | 第56-59页 |
| 附录B 原生质体分离液配方 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 个人简介 | 第63页 |
