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X染色体起源的逆转座基因RPL10L在精子发生中的功能及机制研究

摘要第5-6页
Abstract第6-7页
第1章 绪论第14-42页
    1.1 性染色体第14-24页
        1.1.1 性染色体及性别决定第14-15页
        1.1.2 哺乳动物性染色体第15-16页
        1.1.3 性染色体的起源及进化第16-20页
        1.1.4 X染色体在哺乳动物中的进化第20-22页
        1.1.5 性染色体剂量补偿效应第22-24页
    1.2 X染色体起源的逆转座基因第24-30页
        1.2.1 逆转座基因简介第24-25页
        1.2.2 X染色体起源的逆转座基因及其进化假说第25-28页
        1.2.3 X染色体来源的逆转座基因的功能假说第28-30页
    1.3 哺乳动物精子发生及减数分裂性染色体沉默第30-42页
        1.3.1 哺乳动物精子发生主要过程第30-36页
        1.3.2 减数分裂性染色体失活第36-40页
        1.3.3 性染色体在哺乳动物精子发生过程中的转录活性第40-42页
第2章 实验材料与方法第42-68页
    2.1 实验材料第42-53页
        2.1.1 小鼠信息第42页
        2.1.2 细胞系及菌种第42页
        2.1.3 质粒载体第42-43页
        2.1.4 siRNA第43页
        2.1.5 引物序列第43-45页
        2.1.6 抗体信息第45-46页
        2.1.7 试剂及耗材第46-51页
        2.1.8 实验相关溶液配方第51-52页
        2.1.9 实验仪器第52-53页
    2.2 实验方法第53-68页
        2.2.1 质粒载体构建第53-55页
        2.2.2 细胞培养及转染第55-57页
        2.2.3 外源导入RPL10L补偿内源RPL10敲除实验第57-58页
        2.2.4 核糖体分离第58页
        2.2.5 Polysome profile第58-59页
        2.2.6 Western Blot第59-60页
        2.2.7 RNA抽提第60-61页
        2.2.8 逆转录(RT)第61页
        2.2.9 RT-PCR第61-62页
        2.2.10 荧光定量PCR第62页
        2.2.11 培养细胞免疫荧光染色第62-63页
        2.2.12 流式细胞仪检测细胞周期第63页
        2.2.13 STA-PUT法分离小鼠不同发育阶段的雄性生殖细胞第63-64页
        2.2.14 基因敲除及转基因小鼠构建第64-67页
        2.2.15 高通量蛋白质谱定量分析第67页
        2.2.16 统计学显著性分析第67-68页
第3章 实验结果及讨论第68-98页
    3.1 实验结果第68-96页
        3.1.1 RPL10L仅存在于真兽亚纲哺乳动物第68-69页
        3.1.2 RPL10L在人和小鼠睾丸中特异表达第69-70页
        3.1.3 Rpl10l敲除导致小鼠精子发生失败及雄性个体生育力丧失第70-74页
        3.1.4 Rpl10l敲除导致减数第一次分裂前期向中期转换失败第74-77页
        3.1.5 RPL10L与RPL10蛋白均参与核糖体组装第77-80页
        3.1.6 Rpl10l敲除的粗线期及双线期精母细胞中核糖体生成减少第80-83页
        3.1.7 Rpl10在减数分裂性染色体失活过程中转录沉默第83-86页
        3.1.8 RPL10对体细胞的核糖体生成及细胞增殖至关重要第86-88页
        3.1.9 Rpl10l与Rpl10在小鼠精子发生不同发育阶段的生殖细胞中表达互补第88页
        3.1.10 293T细胞中导入外源RPL10L能够替代内源RPL10的功能第88-91页
        3.1.11 Rpl10转基因能够挽救Rpl10l敲除小鼠的精子发生和生育力第91-96页
    3.2 讨论及总结第96-98页
        3.2.1 Rpl10l是首个被报道的对精子发生减数分裂至关重要的X染色体起源的逆转座基因第96页
        3.2.2 Rpl10l及Rpl10的研究证实了逆转座基因的补偿假说第96-98页
参考文献第98-109页
攻读博士期间的主要学习成果第109-110页
致谢第110-112页
附录1 RPL10L与其直系同源物RPL10的基本信息第112-114页
附录2 Rpl10l~(+/+)和Rpl10l~(-/-)粗线期及双线期精母细胞中含量有差异的蛋白第114-137页
附录3 Rpl10l~(+/+)和Rpl10l~(-/-)粗线期及双线期精母细胞中被定量的核糖体蛋白第137-138页

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