| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 宏基因组学概述 | 第12页 |
| 1.2 构建宏基因组文库的准备 | 第12-14页 |
| 1.2.1 宏基因组文库的样品来源 | 第12-14页 |
| 1.2.2 宏基因组文库载体和宿主的选择 | 第14页 |
| 1.3 宏基因组文库筛选技术 | 第14-15页 |
| 1.4 卤化酶与卤化物 | 第15-20页 |
| 1.4.1 卤化酶 | 第15-18页 |
| 1.4.2 卤化物 | 第18-20页 |
| 1.5 酯酶 | 第20-21页 |
| 1.6 研究内容与意义 | 第21-24页 |
| 第二章 YNF3与YNF8宏基因组文库构建与分析 | 第24-40页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第24-26页 |
| 2.2 仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.3 试验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 环境高分子量总DNA (HMW eDNA)的制备与纯化 | 第27-29页 |
| 2.3.2 末端修复与连接 | 第29-30页 |
| 2.3.3 包装、侵染与计数 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-36页 |
| 2.4.1 用于文库构建的eDNA的选择 | 第31-32页 |
| 2.4.2 阳性单克隆的质粒检测 | 第32-33页 |
| 2.4.3 阳性单克隆的质粒插入片段多样性检测 | 第33-34页 |
| 2.4.4 阳性单克隆的质粒插入片段大小分析 | 第34-36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-37页 |
| 2.6 本章小结 | 第37-40页 |
| 第三章 YNF3与YNF8宏基因组文库中卤化酶相关基因簇的筛选 | 第40-54页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第40-43页 |
| 3.2 仪器设备 | 第43页 |
| 3.3 试验方法 | 第43-46页 |
| 3.3.1 卤化酶相关基因的筛选 | 第43-44页 |
| 3.3.2 Taq酶的制备 | 第44-45页 |
| 3.3.3 高效脱盐Escherichia coli DH5α感受态的制备与电转化 | 第45-46页 |
| 3.3.4 含卤化酶相关基因的单克隆的筛选 | 第46页 |
| 3.4 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.4.1 卤化酶相关基因的筛选 | 第46-48页 |
| 3.4.2 含卤化酶相关基因的单克隆的筛选 | 第48-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-51页 |
| 3.6 本章小结 | 第51-54页 |
| 第四章 YNF8宏基因组文库中新型酯酶的生化特性 | 第54-64页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第54-55页 |
| 4.2 仪器设备 | 第55页 |
| 4.3 试验方法 | 第55-58页 |
| 4.3.1 EstGX1最适温度的确定 | 第55页 |
| 4.3.2 EstGX1最适pH的确定 | 第55页 |
| 4.3.3 EstGX1的温度稳定性 | 第55-56页 |
| 4.3.4 EstGX1的底物特异性 | 第56页 |
| 4.3.5 金属离子、金属离子螯合剂、有机溶剂、表面活性剂对EstGX1的影响 | 第56页 |
| 4.3.6 EstGX1的蛋白定量 | 第56-57页 |
| 4.3.7 EstGX1的K_m值测定 | 第57-58页 |
| 4.4 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.4.1 EstGX1最适温度的确定 | 第58页 |
| 4.4.2 EstGX1最适pH的确定 | 第58-59页 |
| 4.4.3 EstGX1的温度稳定性 | 第59页 |
| 4.4.4 EstGX1的底物特异性 | 第59-60页 |
| 4.4.5 金属离子、金属离子螯合剂、有机溶剂、洗涤剂对EstGX1的影响 | 第60-61页 |
| 4.4.6 EstGX1的K_m值测定 | 第61-62页 |
| 4.5 讨论 | 第62页 |
| 4.6 本章小结 | 第62-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第78页 |
