| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词英汉对照 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 星型胶质细胞研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 星型胶质细胞的分离与体外培养 | 第11-12页 |
| 1.1.2 星型胶质细胞的形态观察 | 第12页 |
| 1.1.3 星形胶质细胞生物学特性与生理学功能 | 第12-15页 |
| 1.2 细胞衰老概述 | 第15-17页 |
| 1.2.1 引起细胞衰老的原因 | 第15-16页 |
| 1.2.2 细胞衰老的调控途径 | 第16-17页 |
| 1.3 端粒与细胞永生化 | 第17-19页 |
| 1.3.1 端粒长度维护机制 | 第17-18页 |
| 1.3.2 细胞永生化方法 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的、意义及技术路线 | 第19-21页 |
| 1.4.1 本研究的目的及意义 | 第19页 |
| 1.4.2 本研究的技术路线 | 第19-21页 |
| 第2章 星形胶质细胞的分离及培养 | 第21-27页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂耗材 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 样本采集 | 第22页 |
| 2.2.2 细胞分离培养 | 第22页 |
| 2.2.3 KM小鼠星形胶质细胞的传代及纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.4 KM小鼠星型胶质细胞的冻存与复苏 | 第23页 |
| 2.2.5 星形胶质细胞GFAP免疫荧光鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 结果 | 第24-25页 |
| 2.3.1 形态学观察 | 第24-25页 |
| 2.3.2 纯度鉴定 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25页 |
| 2.5 小结 | 第25-27页 |
| 第3章 永生化小鼠大脑星型胶质细胞系的建立 | 第27-51页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-34页 |
| 3.1.1 小鼠大脑星形胶质细胞与慢病毒包装辅助质粒 | 第27页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 3.1.3 主要试剂耗材(除2.1.1所列试剂外另需) | 第28页 |
| 3.1.4 慢病毒骨架质粒pCDH-CMV-hTERT-EF1-copGFP的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.5 慢病毒骨架质粒pCDH-CMV-hTERT-EF1-copGFP的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.1.6 慢病毒包装用辅助质粒及骨架质粒的提取(去除内毒素) | 第30-32页 |
| 3.1.7 质粒纯度和浓度检测 | 第32页 |
| 3.1.8 慢病毒包装及浓缩 | 第32-33页 |
| 3.1.9 慢病毒滴毒检测 | 第33页 |
| 3.1.10 慢病毒侵染星形胶质细胞 | 第33页 |
| 3.1.11 阳性星形胶质细胞的筛选 | 第33-34页 |
| 3.2 hTERT-KMAS的形态学观察与生物学特征检测 | 第34-38页 |
| 3.2.1 hTERT-KMAS形态学观察 | 第34页 |
| 3.2.2 外源基因表达检测 | 第34-35页 |
| 3.2.3 生长曲线绘制 | 第35页 |
| 3.2.4 q-PCR检测端粒长度 | 第35-37页 |
| 3.2.5 核型分析 | 第37页 |
| 3.2.6 悬浮生长能力分析 | 第37-38页 |
| 3.2.7 细胞周期检测 | 第38页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第38页 |
| 3.3 结果 | 第38-47页 |
| 3.3.1 PCR以及酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.3.2 质粒浓度和纯度 | 第39-40页 |
| 3.3.3 转染效率 | 第40页 |
| 3.3.4 病毒滴度 | 第40-41页 |
| 3.3.5 细胞分选 | 第41-42页 |
| 3.3.6 hTERT-KMAS形态 | 第42-43页 |
| 3.3.7 hTERT在细胞中的表达情况 | 第43-44页 |
| 3.3.8 生长曲线对比 | 第44-45页 |
| 3.3.9 端粒长度 | 第45页 |
| 3.3.10 染色体核型观察 | 第45-46页 |
| 3.3.11 软琼脂培养克隆形成比较 | 第46页 |
| 3.3.12 细胞周期检测 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 附录 | 第61-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第75页 |
