| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一章 猪链球菌2型主要毒力因子及致病机理 | 第13-25页 |
| 1 猪链球菌2型毒力因子的研究进展 | 第13-18页 |
| ·荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS) | 第14页 |
| ·猪溶血素(Suilysin,SLY) | 第14-15页 |
| ·溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein,MRP)和胞外因子(extracellularfactor,EF) | 第15页 |
| ·血清浑浊因子(Opacity-factor of serum,OFS) | 第15-16页 |
| ·分选酶(Sortases,SRT) | 第16页 |
| ·丙氨酰酶A(D-alanylationA,DltA) | 第16页 |
| ·纤连蛋白和纤连蛋白结合蛋白(Fibronectin-and fibrinogen-binding protein of S.suis,FBPS) | 第16-17页 |
| ·3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) | 第17页 |
| ·猪链球菌烯醇化酶(SsEno) | 第17页 |
| ·SalK和SalR二元调控基因 | 第17-18页 |
| ·酶类(enzyme) | 第18页 |
| 2 猪链球菌2型致病机理的研究 | 第18-21页 |
| ·粘附和侵袭机制 | 第18-19页 |
| ·SS2在血液中存活和中枢神经系统的入侵 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-25页 |
| 第二篇 试验研究 | 第25-73页 |
| 第二章 猪链球菌2型强毒株和弱毒株的基因组比较分析及DBP基因在猪链球菌中的分布 | 第25-41页 |
| 摘要 | 第25-26页 |
| 1 材料与方法 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·试剂与仪器 | 第26-29页 |
| ·序列分析 | 第29页 |
| ·细菌总RNA提取 | 第29-31页 |
| ·采用Trizolz法提取ZY05719菌株总RNA | 第29-30页 |
| ·cDNA的合成 | 第30页 |
| ·qRT-PCR对Dbp基因的表达分析 | 第30-31页 |
| ·细菌基因组的提取 | 第31页 |
| ·Dbp基因在SS中分布检测 | 第31-32页 |
| 2 试验结果 | 第32-36页 |
| ·序列分析 | 第32-33页 |
| ·Dbp基因的表达分析 | 第33-34页 |
| ·Dbp基因分布检测 | 第34-36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| 参考文献 | 第39-40页 |
| Abstract | 第40-41页 |
| 第三章 猪链球菌2型DBP基因缺失株的构建 | 第41-55页 |
| 摘要 | 第41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-49页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌株、质粒 | 第41-42页 |
| ·试剂和仪器 | 第42-43页 |
| ·细菌的培养 | 第43页 |
| ·细菌基因组的提取 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·基因缺失载体构建 | 第44-48页 |
| ·PCR | 第44-45页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第45页 |
| ·PCR扩增产物回收 | 第45-46页 |
| ·融合PCR | 第46页 |
| ·融合PCR产物回收 | 第46页 |
| ·自杀性质粒pSET4S的提取 | 第46-47页 |
| ·目的片段的酶切、连接 | 第47页 |
| ·制备DH5α感受态细胞 | 第47-48页 |
| ·连接产物的转化及鉴定 | 第48页 |
| ·基因缺失株的构建 | 第48-49页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| ·电转化 | 第49页 |
| ·缺失株(ΔDbp)的筛选及鉴定 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-52页 |
| ·基因缺失质粒的构建 | 第49-51页 |
| ·缺失株(ΔDbp)的鉴定 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-54页 |
| abstracts | 第54-55页 |
| 第四章 猪链球菌2型DBP基因缺失株的生物学特性及致病性分析 | 第55-63页 |
| 摘要 | 第55-56页 |
| 1 材料和方法 | 第56-57页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·菌种及试验动物 | 第56页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第56页 |
| ·生长特性分析 | 第56页 |
| ·形态学比较 | 第56-57页 |
| ·斑马鱼毒力试验 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-59页 |
| ·形态学比较 | 第57-58页 |
| ·生长特性分析 | 第58页 |
| ·斑马鱼毒力试验 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-62页 |
| Abstracts | 第62-63页 |
| 第五章 Dbp基因的克隆表达及其免疫反应性分析 | 第63-73页 |
| 摘要 | 第63-64页 |
| 1 材料与方法 | 第64-68页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·菌株和试验动物 | 第64页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第64-65页 |
| ·血清制备 | 第65页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第65-67页 |
| ·重组质粒的构建 | 第65页 |
| ·重组质粒的转化 | 第65-66页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第66-67页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第67页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第67-68页 |
| ·免疫转印 | 第68页 |
| 2 结果 | 第68-70页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第68-69页 |
| ·诱导表达 | 第69页 |
| ·免疫转印 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-72页 |
| Abstract | 第72-73页 |
| 全文总结 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
