| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 专业词汇中英文对照表 | 第11-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-32页 |
| ·检测突变基因的意义 | 第16-18页 |
| ·低丰度突变基因检测方法的发展现状 | 第18-28页 |
| ·针对已知基因突变的富集检测方法 | 第19-21页 |
| ·针对未知基因突变的富集检测方法 | 第21-24页 |
| ·COLD-PCR和ice-COLD-PCR | 第24-28页 |
| ·本课题立项依据及主要研究内容 | 第28-32页 |
| 第二章 标准样品的构建 | 第32-52页 |
| ·基因的克隆 | 第32-43页 |
| ·TP53基因第8外显子序列 | 第32页 |
| ·载体 | 第32-34页 |
| ·目的序列的扩增 | 第34-36页 |
| ·酶切 | 第36-37页 |
| ·连接 | 第37页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞TOP10 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38-39页 |
| ·PCR法筛选阳性克隆 | 第39-42页 |
| ·测序鉴定 | 第42-43页 |
| ·突变体构建 | 第43-49页 |
| ·定点突变 | 第43-44页 |
| ·PCR产物回收 | 第44-46页 |
| ·酶切 | 第46-47页 |
| ·连接 | 第47页 |
| ·转化 | 第47页 |
| ·PCR法筛选阳性克隆 | 第47-49页 |
| ·测序鉴定 | 第49页 |
| ·标准样品的构建 | 第49-51页 |
| ·质粒的提取 | 第49-51页 |
| ·稀释法构建标准样品 | 第51页 |
| ·测序验证 | 第51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第三章 封闭序列的合成及其理化性质分析 | 第52-64页 |
| ·封闭序列的设计 | 第52页 |
| ·封闭序列的合成与纯化 | 第52-55页 |
| ·封闭序列的合成 | 第52-53页 |
| ·封闭序列的纯化 | 第53-55页 |
| ·纯化产物产率的计算 | 第55-56页 |
| ·封闭序列的质谱鉴定 | 第56-57页 |
| ·封闭序列的熔解曲线测定 | 第57-59页 |
| ·封闭序列与反向互补序列之间进行退火 | 第57页 |
| ·3%Agarose 电泳验证退火效率 | 第57页 |
| ·Real Time测定熔解曲线 | 第57-59页 |
| ·单碱基错配对封闭序列Tm值的影响 | 第59-61页 |
| ·本章小结 | 第61-64页 |
| 第四章 LNA-COLD-PCR平台的搭建 | 第64-104页 |
| ·不同关键变性温度对野生型及突变型基因扩增效果的影响 | 第64-66页 |
| ·混合样品的初步条件摸索 | 第66-71页 |
| ·LNA-COLD-PCR条件的系统优化 | 第71-95页 |
| ·以含有G818A的标准样品进行LNA-COLD-PCR的条件优化 | 第71-90页 |
| ·BS60-1终浓度250pM | 第71-75页 |
| ·BS60-1终浓度2.5nM | 第75-79页 |
| ·BS60-1终浓度25nM | 第79-82页 |
| ·BS60-1终浓度10nM | 第82-86页 |
| ·比较不同BS60-1浓度对G818A富集效果的影响 | 第86-87页 |
| ·不同模板浓度对G818A富集效果的影响 | 第87-90页 |
| ·以含有C847T的标准样品进行LNA-COLD-PCR的条件优化 | 第90-95页 |
| ·不同标准检测样品的富集检测效果 | 第95页 |
| ·其他封闭序列的尝试 | 第95-98页 |
| ·对照方法的选择 | 第98-100页 |
| ·标准样本的检测 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-102页 |
| ·本章小结 | 第102-104页 |
| 第五章 总结 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-116页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第116页 |
