摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-11页 |
第1章 前言 | 第11-18页 |
·FcγRIIb研究进展 | 第11-16页 |
·Fc受体(FcR) | 第11页 |
·FcγRIIb基因与蛋白结构 | 第11-12页 |
·可溶性FcγRIIb | 第12页 |
·FcγRIIb的生物学功能 | 第12-13页 |
·FcγRIIb与疾病相关 | 第13-15页 |
·FcγRIIb在疾病治疗中的作用 | 第15-16页 |
·噬菌体展示技术研究进展 | 第16-17页 |
·噬菌体展示技术 | 第16-17页 |
·噬菌体筛选多肽药物展望 | 第17页 |
·本研究的研究目的、内容与意义 | 第17-18页 |
第2章 sFcγIIb蛋白的表达及活性鉴定 | 第18-40页 |
·实验材料 | 第18-21页 |
·细胞系 | 第18页 |
·菌种和质粒 | 第18页 |
·主要试剂 | 第18页 |
·主要仪器设备 | 第18-19页 |
·主要溶液 | 第19-21页 |
·培养基 | 第21页 |
·sFcγIIb原核表达载体的构建 | 第21-25页 |
·总RNA的提取 | 第21页 |
·反转录 | 第21-22页 |
·引物的设计与合成 | 第22页 |
·FcγIIB基因片段的PCR扩增 | 第22-23页 |
·目的基因FcγIIB与T载体的连接 | 第23页 |
·连接产物的转化: | 第23-24页 |
·sFcγIIB基因片段的扩增 | 第24页 |
·目的基因sFcγIIB与pET17b载体的连接 | 第24-25页 |
·重组质粒pET-17b-sFcγIIB的双酶切鉴定 | 第25页 |
·sFcγIIb蛋白的表达与纯化 | 第25-29页 |
·利用软件在线对重组蛋白sFcγRIIb理化性质进行分析 | 第25页 |
·sFcγIIb蛋白的表达 | 第25-26页 |
·重组蛋白的纯化 | 第26页 |
·重组蛋白的复性 | 第26-27页 |
·Western Blot | 第27页 |
·ELISA | 第27-29页 |
·实验结果 | 第29-38页 |
·重组质粒的构建 | 第29-32页 |
·蛋白的诱导表达及纯化 | 第32-38页 |
·讨论 | 第38-40页 |
第3章 sFcγRIIb蛋白结合肽的筛选 | 第40-50页 |
·实验材料 | 第40-41页 |
·试剂 | 第40页 |
·噬菌体筛选材料 | 第40-41页 |
·实验方法 | 第41-45页 |
·噬菌体滴度的测定 | 第41页 |
·噬菌体肽库淘选 | 第41-42页 |
·第二、三、四轮噬菌体淘选 | 第42-43页 |
·每轮洗脱噬菌体与sFcγRIIb蛋白亲和力的鉴定 | 第43页 |
·噬菌斑的扩增 | 第43页 |
·噬菌体DNA的提取 | 第43-44页 |
·琼脂糖凝胶电泳检测噬菌体DNA | 第44页 |
·单链噬菌体DNA序列的测定 | 第44页 |
·氨基酸序列同源性分析 | 第44页 |
·噬菌体与sFcγRIIb亲和力的ELISA鉴定 | 第44-45页 |
·实验结果 | 第45-48页 |
·筛选噬菌体回收率结果 | 第45页 |
·每轮噬菌体筛选后洗脱物与sFcγRIIb蛋白的结合 | 第45-46页 |
·挑取噬菌体单克隆并提取DNA | 第46-47页 |
·单链噬菌体DNA序列测定结果 | 第47-48页 |
·噬菌体单克隆亲和力鉴定 | 第48页 |
·氨基酸序列同源性分析结果 | 第48页 |
·讨论 | 第48-50页 |
第4章 结论 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-56页 |
致谢 | 第56页 |