| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| ·A.ferrooxidans中铁氧化系统介绍 | 第10-14页 |
| ·A.frrooxidans铁氧化系统的简介 | 第10-12页 |
| ·A.frrooxidans中ISC系统的介绍 | 第12-14页 |
| ·铁氧还蛋白Fdx(ferredoxin) | 第14-16页 |
| ·铁氧还蛋白的介绍 | 第14-16页 |
| ·铁硫簇介绍 | 第16-20页 |
| ·铁硫簇的结构 | 第17-18页 |
| ·铁硫簇的功能 | 第18-19页 |
| ·铁硫簇的生物合成 | 第19-20页 |
| ·课题的研究目的与研究内容 | 第20-22页 |
| ·依据和目的 | 第20-21页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第21页 |
| ·论文课题受资助情况 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-37页 |
| ·实验材料 | 第22-27页 |
| ·菌种 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·A.f基因组抽提试剂 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23-24页 |
| ·质粒提取试剂 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE胶保存试剂及装置 | 第25页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂 | 第25-26页 |
| ·铁硫簇体外组装体系 | 第26页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·实验仪器 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-35页 |
| ·菌液的获得 | 第27页 |
| ·基因组提取 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·1.5%琼脂糖凝胶板的制备 | 第29页 |
| ·PCR产物和载体pLMI的鉴定和回收 | 第29-30页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·克隆的转化 | 第31页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第31-32页 |
| ·蛋白质的表达转化 | 第32页 |
| ·蛋白质的表达最佳条件的确定 | 第32-33页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33-34页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第34-35页 |
| ·测试分析方法 | 第35-37页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第35页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Nondenaturing PAGE) | 第35-36页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第36页 |
| ·电子顺磁共振(EPR) | 第36页 |
| ·基质辅助激光解吸串联分行时间质谱(MALDI-TOF) | 第36-37页 |
| 第三章 铁氧还蛋白的表达、纯化 | 第37-42页 |
| ·铁氧还蛋白的克隆、筛选 | 第37-39页 |
| ·铁氧还蛋白基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·铁氧还蛋白基因的连接及阳性克隆的筛选 | 第38-39页 |
| ·铁氧还蛋白的表达 | 第39-41页 |
| ·铁氧还蛋白表达条件的确定 | 第39页 |
| ·铁氧还蛋白的大规模表达、纯化 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE分析铁氧还蛋白 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 铁硫簇组装机理研究 | 第42-52页 |
| ·Fdx铁硫簇组装实验 | 第42-47页 |
| ·Apo-Fdx的制备 | 第42页 |
| ·Fdx铁硫簇的体外组装 | 第42-43页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析apo-Fdx和holo-Fdx | 第43-44页 |
| ·apo-Fdx和holo-Fdx中铁硫元素含量分析 | 第44页 |
| ·UV扫描重组铁氧还蛋白 | 第44-45页 |
| ·EPR对重组铁氧还蛋白的分析 | 第45-46页 |
| ·MALDI-TOF对重组铁氧还蛋白的测定 | 第46-47页 |
| ·铁氧还蛋白可能的铁硫簇组装模型 | 第47-51页 |
| ·L-烯丙基甘氨酸对IscS蛋白活性的影响 | 第47-48页 |
| ·L-烯丙基甘氨酸对Fdx表达纯化的影响 | 第48-49页 |
| ·L-烯丙基甘氨酸对Fdx铁硫簇组装的影响 | 第49-50页 |
| ·铁氧还蛋白中铁硫簇组装的可能途径 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 研究成果 | 第62页 |
