| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 草鱼呼肠孤病毒 | 第12-13页 |
| 2 GCRV 蛋白质功能的研究 | 第13-15页 |
| ·结构蛋白功能的研究 | 第13-14页 |
| ·非结构蛋白功能的研究 | 第14-15页 |
| 3 GCRV 对宿主细胞生理功能影响的研究 | 第15-17页 |
| 4 GCRV 检测及其全基因组测序技术的研究进展 | 第17-20页 |
| ·GCRV 检测方法的研究 | 第18-19页 |
| ·GCRV 全长 cDNA 测序技术的研究 | 第19-20页 |
| 5 蛋白质组学在病毒学研究中的应用 | 第20-22页 |
| ·蛋白质组学的研究方法 | 第20-21页 |
| ·蛋白质组学在水生动物病毒研究中的应用 | 第21-22页 |
| 6 本文研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 草鱼呼肠孤病毒混合感染的检测 | 第23-33页 |
| 1 材料和方法 | 第23-27页 |
| ·仪器与设备 | 第23页 |
| ·材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·所用软件 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-27页 |
| ·病毒分离 | 第24页 |
| ·CIK 细胞的传代培养 | 第24页 |
| ·GCRV 的增殖 | 第24页 |
| ·病毒基因组（dsRNA）的提取 | 第24-25页 |
| ·dsRNA3’加接头 | 第25页 |
| ·dsRNA 连接产物的纯化 | 第25-26页 |
| ·基因组全长 cDNA 的合成 | 第26页 |
| ·单引物 PCR 扩增 | 第26页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第26页 |
| ·T-A 克隆和转化大肠杆菌 | 第26-27页 |
| ·水生呼肠孤病毒的特异性检测 | 第27页 |
| ·验证存在 GCRV 的混合感染 | 第27页 |
| ·序列分析 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-32页 |
| ·采集病毒样品感染草鱼肾细胞 | 第27-28页 |
| ·病毒基因组琼脂糖凝胶分析 | 第28页 |
| ·水生呼肠孤病毒 M6 基因的特异性检测 | 第28-29页 |
| ·FLAC 技术扩增病毒基因组全长 cDNA | 第29-30页 |
| ·部分基因 cDNA 全长测序结果分析 | 第30页 |
| ·GCRV 混合感染的验证 | 第30-31页 |
| ·系统进化树的构建 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 两株 GCRV 病毒复制效率的比较 | 第33-46页 |
| 1 材料和方法 | 第33-37页 |
| ·仪器与设备 | 第33页 |
| ·材料与试剂 | 第33页 |
| ·所用软件 | 第33页 |
| ·试验方法 | 第33-37页 |
| ·两株 GCRV 的分离 | 第33-34页 |
| ·病毒分离的验证 | 第34页 |
| ·体外合成 JX01-S10 和 JX02-S11 的 dsRNA | 第34-35页 |
| ·Real-time RT-PCR 方法的建立 | 第35页 |
| ·标准曲线的建立 | 第35页 |
| ·细胞中复制效率的比较 | 第35页 |
| ·上清中复制效率的比较 | 第35-36页 |
| ·流行病学调查样本的检测 | 第36页 |
| ·GCRV 间交叉免疫的鉴定 | 第36页 |
| ·GCRV 间血清学反应的鉴定 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-44页 |
| ·GCRV-JX01 和 GCRV-JX02 的分离 | 第37-38页 |
| ·病毒分离纯化的鉴定 | 第38-39页 |
| ·体外转录模板的扩增 | 第39页 |
| ·标准曲线的建立 | 第39-40页 |
| ·体内体外复制效率的比较 | 第40-41页 |
| ·临床样本的检测结果 | 第41-43页 |
| ·毒株间免疫交叉保护的研究 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 感染 GCRV-JX01 的 CIK 细胞蛋白质组学分析 | 第46-53页 |
| 1 材料和方法 | 第46-48页 |
| ·仪器与设备 | 第46页 |
| ·材料与试剂 | 第46页 |
| ·所用软件 | 第46-47页 |
| ·试验方法 | 第47-48页 |
| ·感染 GCRV 细胞全蛋白的提取 | 第47页 |
| ·IPG-SDS-PAGE 双向电泳 | 第47页 |
| ·硝酸银染色 | 第47-48页 |
| ·图像扫描和分析 | 第48页 |
| ·胶内酶解及脱盐 | 第48页 |
| ·质谱分析 | 第48页 |
| ·数据库检索 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-51页 |
| ·双向电泳与图谱分析 | 第48-49页 |
| ·差异蛋白的质谱鉴定与分析 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 GCRV-JX01 部分基因的克隆、表达与亚细胞定位研究 | 第53-62页 |
| 1 材料和方法 | 第53-57页 |
| ·仪器与设备 | 第53页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·所用软件 | 第53页 |
| ·试验方法 | 第53-57页 |
| ·病毒全基因组 cDNA 的合成 | 第53页 |
| ·基因 ORF 的扩增 | 第53-55页 |
| ·重组质粒的构建 | 第55页 |
| ·阳性克隆的筛选和质粒提取 | 第55-56页 |
| ·转染重组质粒 | 第56页 |
| ·验证重组质粒在 CIK 细胞中的表达 | 第56-57页 |
| ·亚细胞定位 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-60页 |
| ·载体的酶切验证 | 第57页 |
| ·基因 ORF 的扩增 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白在 CIK 中的表达 | 第58页 |
| ·重组蛋白在 CIK 中的定位 | 第58-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录：论文发表及获奖情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
