| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 1 前言 | 第14-16页 |
| 2 缺血再灌注早期大鼠心肌miR-21的表达变化 | 第16-31页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·实验动物及分组 | 第17页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第17-19页 |
| ·方法 | 第19-26页 |
| ·常用试剂配置 | 第19-21页 |
| ·I/R大鼠模型构建 | 第21-22页 |
| ·留取标本 | 第22页 |
| ·心肌HE染色 | 第22页 |
| ·实时荧光定量PCR检测miR-21的表达水平 | 第22-24页 |
| ·Western blot检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达 | 第24-25页 |
| ·统计分析 | 第25-26页 |
| ·结果 | 第26-29页 |
| ·缺血再灌注大鼠建模情况 | 第26页 |
| ·大鼠心肌HE染色 | 第26-27页 |
| ·大鼠心肌凋亡调控相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达 | 第27-28页 |
| ·I/R大鼠心肌不同区域miR-21的表达 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·结论 | 第30-31页 |
| 3 miR-21在缺血再灌注早期大鼠心肌抗凋亡作用及机制 | 第31-53页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·试剂与仪器 | 第31-33页 |
| ·方法 | 第33-41页 |
| ·主要试剂配制 | 第33页 |
| ·构建rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21 | 第33-37页 |
| ·转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21预实验 | 第37-38页 |
| ·实验动物分组 | 第38页 |
| ·病毒载体转染大鼠 | 第38页 |
| ·构建大鼠I/R模型 | 第38页 |
| ·动物处死 | 第38页 |
| ·Realtime PCR检测大鼠心肌缺血区miR-21、PTENmRNA的表达水平 | 第38-40页 |
| ·免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达 | 第40-41页 |
| ·Western blot法检测PTEN、p-AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达 | 第41页 |
| ·统计分析 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-50页 |
| ·成功构建rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21 | 第41-43页 |
| ·实验摸索最佳转染浓度及转染时间 | 第43-46页 |
| ·实验大鼠存活情况 | 第46页 |
| ·转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21后大鼠心肌miR-21、PTEN的水平 | 第46-47页 |
| ·大鼠心肌缺血区miR-21表达情况 | 第47页 |
| ·I/R后大鼠心肌缺血区凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达水平 | 第47-49页 |
| ·缺血再灌注大鼠心肌缺血区PTEN/AKT通路变化 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| 4 miR-21对缺氧-复氧诱导H9C2细胞凋亡的保护作用及机制 | 第53-67页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·主要试剂配制 | 第54页 |
| ·鼠心肌H9C2细胞培养 | 第54页 |
| ·H9C2细胞中miR-21表达抑制浓度探索试验 | 第54-55页 |
| ·H9C2细胞中miR-21过表达浓度探索实验 | 第55-56页 |
| ·细胞活力检测(MTT法) | 第56页 |
| ·H9C2细胞分组 | 第56页 |
| ·细胞H/R处理 | 第56页 |
| ·Realtime PCR方法检测miR-21、PTENmRNA的表达 | 第56-57页 |
| ·Western blot方法检测凋亡调控因子Bcl-2、Bax、Caspase-3、下游信号通路PTEN/AKT的水平 | 第57页 |
| ·Annexin-V/PI双染测定细胞凋亡率 | 第57页 |
| ·统计方法 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-64页 |
| ·H9C2细胞生长状态 | 第57-58页 |
| ·浓度探索实验H9C2细胞miR-21、PTEN表达水平 | 第58-59页 |
| ·H9C2细胞活力的测定 | 第59-60页 |
| ·H/R处理后H9C2细胞中miR-21的表达变化 | 第60页 |
| ·各组H9C2细胞中凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的水平 | 第60-62页 |
| ·H/R处理后H9C2细胞凋亡率 | 第62-63页 |
| ·细胞凋亡信号通路PTEN/AKT的表达水平 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·结论 | 第65-67页 |
| 5 miR-21介导曲美他嗪在缺氧-复氧诱导H9C2细胞凋亡的保护作用 | 第67-75页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-69页 |
| ·实验分组 | 第67-68页 |
| ·miR-21 inhibitors转染 | 第68页 |
| ·TMZ预处理细胞 | 第68页 |
| ·细胞H/R处理 | 第68页 |
| ·H9C2细胞活力测定 | 第68页 |
| ·H9C2细胞miR-21的水平测定 | 第68页 |
| ·H9C2细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3的水平测定 | 第68页 |
| ·H9C2细胞的凋亡率测定 | 第68页 |
| ·H9C2细胞PTEN、p-AKT的水平测定 | 第68-69页 |
| ·统计方法 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| ·各组H9C2细胞miR-21的水平 | 第69页 |
| ·各组H9C2细胞凋亡调控因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平 | 第69-70页 |
| ·各组H9C2细胞的凋亡率 | 第70-71页 |
| ·细胞凋亡信号通路PTEN/AKT的水平 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 综述 | 第85-105页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读学位期间的成果 | 第106页 |
