| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 Rhodococcus sp.R04水解酶 | 第14-15页 |
| ·Rhodococcus sp.R04水解酶 | 第14页 |
| ·Rhodococcus sp.R04水解酶的催化三联体 | 第14-15页 |
| ·Rhodococcus sp.R04水解酶的研究进展 | 第15页 |
| 2 定向进化技术 | 第15-20页 |
| ·突变体基因文库的构建 | 第16-18页 |
| ·文库的筛选 | 第18-19页 |
| ·定向进化的应用 | 第19-20页 |
| 3 蛋白质分子构象的测定方法 | 第20-21页 |
| ·晶体蛋白质分子结构的测定 | 第20页 |
| ·溶液中蛋白质分子构象的测定 | 第20-21页 |
| 4 本论文研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-28页 |
| 第二章 Rhodococcus sp.R04水解酶BphD的定向进化 | 第28-40页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-32页 |
| ·DNA shuffling源基因的获得 | 第29-30页 |
| ·DNase Ⅰ消化 | 第30-31页 |
| ·无引物PCR | 第31页 |
| ·有引物PCR | 第31-32页 |
| ·突变文库的构建 | 第32页 |
| ·DNA shuffling突变文库的筛选 | 第32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-37页 |
| ·DNA shuffling源基因 | 第32-34页 |
| ·DNase Ⅰ消化 | 第34页 |
| ·DNA片段的重装配 | 第34-35页 |
| ·有引物PCR | 第35页 |
| ·突变文库 | 第35页 |
| ·DNA shuffling突变文库的初步筛选 | 第35-37页 |
| 4 小结 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 第三章 BphD及突变酶的性质研究 | 第40-48页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第40页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-42页 |
| ·BphD及突变体基因的克隆 | 第41页 |
| ·BphD及突变体基因表达载体的构建 | 第41页 |
| ·BphD及其突变酶的诱导表达及纯化 | 第41-42页 |
| ·BphD及其突变酶的性质研究 | 第42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-45页 |
| ·BphD及其突变体的表达及纯化 | 第43页 |
| ·BphD及其突变酶的酶活 | 第43-44页 |
| ·BphD及其突变酶的热稳定性 | 第44页 |
| ·BphD及其突变酶的稳态动力学分析 | 第44-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第四章 脯氨酸突变对BphD性质的影响 | 第48-62页 |
| 1 材料 | 第48页 |
| ·菌株与质粒 | 第48页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-52页 |
| ·BphD点突变体的构建 | 第48-50页 |
| ·BphD及其突变酶表达量的分析 | 第50-51页 |
| ·BphD及其突变酶的纯化 | 第51页 |
| ·BphD及其突变酶的酶活性分析 | 第51页 |
| ·BphD及其突变酶的热稳定性测定 | 第51页 |
| ·BphD及其突变酶的圆二色性分析 | 第51-52页 |
| ·BphD及其突变酶的荧光光谱分析 | 第52页 |
| 3 结果与讨论 | 第52-59页 |
| ·BphD的定点突变 | 第52页 |
| ·BphD及其突变酶的表达 | 第52-54页 |
| ·BphD及其突变酶的纯化 | 第54页 |
| ·BphD及其突变酶的活性 | 第54-55页 |
| ·BphD及其突变酶的热稳定性 | 第55-56页 |
| ·BphD及其突变酶的圆二色性(CD) | 第56-58页 |
| ·BphD及其突变酶的荧光光谱 | 第58-59页 |
| 4 小结 | 第59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 个人简况及联系方式 | 第64-66页 |
