| 本论文的创新性工作 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 常用英文缩写词汇 | 第8-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-20页 |
| 第一章 疱疹病毒UL18基因及其编码蛋白的研究进展 | 第15-20页 |
| 1 疱疹病毒UL18基因序列特点 | 第15页 |
| 2 疱疹病毒UL18编码蛋白特点 | 第15-16页 |
| 3 UL18蛋白的作用 | 第16-18页 |
| ·VP23与核衣壳的形成 | 第16-18页 |
| ·VP23对衣壳关闭的作用 | 第18页 |
| ·VP23对病毒毒力的影响 | 第18页 |
| ·UL18蛋白限制NK细胞介导杀伤作用 | 第18页 |
| 4 UL18蛋白的定位 | 第18-19页 |
| 5 展望 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验研究 | 第20-87页 |
| 第二章 鸭肠炎病毒UL18基因的序列特征及密码子偏爱性分析 | 第20-38页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·基因文库 | 第20-21页 |
| ·实验数据 | 第21页 |
| ·主要生物信息学分析软件 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-22页 |
| ·DEV UL18基因核酸序列的分子特性分析 | 第21-22页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白序列的分子特性分析 | 第22页 |
| ·DEV UL18基因的密码子偏爱性分析 | 第22页 |
| 2 结果 | 第22-32页 |
| ·DEV UL18基因核酸序列的分子特征 | 第22-23页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白序列的分子特征 | 第23-29页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白的氨基酸组成分析 | 第23-24页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白的结构域 | 第24页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白的系统进化树 | 第24页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白信号肽切割位点预测 | 第24-25页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白磷酸化位点预测 | 第25-26页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白糖基化位点预测 | 第26页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白跨膜区预测 | 第26页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白疏水性分析 | 第26-27页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白抗原性分析 | 第27-28页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白二级结构和三级结构预测分析 | 第28-29页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白的亚细胞定位 | 第29页 |
| ·DEV UL18基因的密码子偏爱性 | 第29-32页 |
| ·DEV UL18基因与27种疱疹病毒UL18基因密码子使用偏爱性分析 | 第29页 |
| ·DEV UL18基因密码子使用和氨基酸组成的偏爱性分析 | 第29-31页 |
| ·DEV UL18基因密码子使用与人、酵母和大肠杆菌密码子使用偏爱性比较 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-37页 |
| ·DEV UL18基因的分子特性 | 第32-34页 |
| ·DEV UL18基因编码蛋白的抗原性 | 第34-35页 |
| ·DEV UL18编码蛋白与其它疱疹病毒UL18蛋白间的系统进化关系 | 第35-36页 |
| ·DEV UL18基因的密码子偏爱性 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37页 |
| Abstract | 第37-38页 |
| 第三章 鸭肠炎病毒UL18基因的原核表达、抗体制备及应用 | 第38-75页 |
| 摘要 | 第38页 |
| 1 材料 | 第38-42页 |
| ·菌株、毒株和质粒 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第38-42页 |
| ·主要试剂 | 第38-40页 |
| ·主要试剂配制 | 第40-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-54页 |
| ·DEV UL18基因的克隆 | 第42-44页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·DNA的提取 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增DEV UL18基因 | 第43页 |
| ·DEV UL18基因的PCR产物回收 | 第43页 |
| ·DEV UL18基因的T-载体克隆与鉴定 | 第43-44页 |
| ·DEV UL18基因原核表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·pMD18-T-UL18与表达质粒pET-32a(+)的提取、酶切与回收 | 第44-45页 |
| ·构建重组表达菌株 | 第45页 |
| ·DEV UL18重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第45-47页 |
| ·重组表达质粒pET32a-UL18的诱导表达 | 第46页 |
| ·重组质粒pET32a-UL18诱导条件优化 | 第46-47页 |
| ·DEV UL18重组蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性分析 | 第47页 |
| ·重组质粒pET32a-UL18大量诱导表达 | 第47页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第47页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第47页 |
| ·Western Blotting检测 | 第47-48页 |
| ·兔抗DEV UL18重组蛋白抗体的制备及纯化 | 第48-49页 |
| ·兔抗重组蛋白高免血清的制备 | 第48页 |
| ·免抗DEV UL18重组蛋白效价测定 | 第48页 |
| ·兔抗重组蛋白高免血清IgG的纯化及鉴定 | 第48-49页 |
| ·基于DEV UL18重组蛋白间接ELISA法检测DEV抗体的应用 | 第49-50页 |
| ·最佳抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第49页 |
| ·最佳酶标二抗工作浓度的确定 | 第49页 |
| ·DEV-UL18-ELISA方法临界值的确定 | 第49页 |
| ·特异性试验 | 第49页 |
| ·敏感性试验 | 第49页 |
| ·重复性试验 | 第49-50页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫组化法检测DEV感染鸭组织的应用 | 第50-51页 |
| ·组织样品的采集与处理 | 第50页 |
| ·间接免疫酶组化检测DEV UL18蛋白方法的建立 | 第50页 |
| ·间接免疫酶组化检测DEV UL18蛋白方法的优化 | 第50页 |
| ·特异性实验 | 第50-51页 |
| ·结果判断标准 | 第51页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫组化法对DEV感染鸭组织的检测 | 第51页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫荧光法检测DEV感染鸭组织的应用 | 第51-53页 |
| ·组织样品的采集与处理 | 第51页 |
| ·间接免疫荧光检测DEV UL18蛋白方法的建立 | 第51-52页 |
| ·间接免疫荧光检测DEV感染鸭组织UL18蛋白方法的优化 | 第52页 |
| ·特异性实验 | 第52页 |
| ·结果判断标准 | 第52-53页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫荧光法对DEV感染鸭组织的检测 | 第53页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫荧光法检测DEV感染宿主细胞的应用 | 第53-54页 |
| ·免疫荧光检测DEV感染宿主细胞方法的建立 | 第53页 |
| ·免疫荧光检测DEV感染宿主细胞条件的优化 | 第53-54页 |
| ·免疫荧光特异性检测 | 第54页 |
| ·间接免疫荧光检测的结果判定 | 第54页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫荧光法对DEV感染宿主细胞的检测 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-67页 |
| ·DEV UL18基因的PCR扩增结果 | 第54页 |
| ·DEV UL18基因的T-克隆鉴定结果 | 第54页 |
| ·原核表达质粒pET32a-UL18的构建及鉴定结果 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pET32a-UL18的诱导表达结果 | 第55页 |
| ·重组质粒pET32a-UL18的诱导表达条件优化结果 | 第55-56页 |
| ·表达宿主菌优化 | 第55-56页 |
| ·温度条件优化 | 第56页 |
| ·时间条件优化 | 第56页 |
| ·IPTG浓度优化 | 第56页 |
| ·重组蛋白pET32a/DEV-UL18的纯化结果 | 第56-58页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性分析 | 第56页 |
| ·重组蛋白的大量纯化 | 第56-58页 |
| ·兔抗重组蛋白pET32a/DEV-UL18抗体效价检测结果 | 第58页 |
| ·兔抗重组蛋白pET32a/DEV-UL18抗体IgG的纯化结果 | 第58页 |
| ·Western Blotting检测结果 | 第58页 |
| ·基于DEV UL18重组蛋白间接ELISA法检测DEV抗体的应用 | 第58-61页 |
| ·最佳抗原包被浓度和血清稀释度 | 第58-60页 |
| ·最佳酶标二抗工作浓度 | 第60页 |
| ·ELISA阴阳性临界值的判定标准 | 第60页 |
| ·特异性试验的检测结果 | 第60页 |
| ·敏感性试验的检测结果 | 第60-61页 |
| ·重复性试验的检测结果 | 第61页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫组化的应用 | 第61-62页 |
| ·间接免疫酶组化检测DEV感染鸭的组织切片优化结果 | 第61-62页 |
| ·特异性试验结果 | 第62页 |
| ·间接免疫酶组化法检测DEV感染鸭组织切片结果 | 第62页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫荧光检测DEV感染组织的应用 | 第62-64页 |
| ·间接免疫荧光检测DEV感染鸭组织方法的优化 | 第62-64页 |
| ·特异性试验 | 第64页 |
| ·间接免疫荧光法检测DEV感染鸭组织的结果 | 第64页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫荧光检测DEV感染宿主细胞的应用 | 第64-67页 |
| ·间接免疫荧光法检测DEV感染宿主细胞飞片条件优化结果 | 第64-65页 |
| ·特异性试验 | 第65-66页 |
| ·间接免疫荧光检测DEV感染宿主细胞飞片结果 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-74页 |
| ·DEV UL18基因的引物设计和克隆测序 | 第67页 |
| ·DEV UL18基因的克隆测序和表达载体的选择 | 第67-68页 |
| ·疱疹病毒UL18基因的表达 | 第68-69页 |
| ·兔抗重组蛋白pET32a/DEV-UL18抗体IgG的制备和纯化 | 第69页 |
| ·基于DEV UL18重组蛋白间接ELISA法检测DEV抗体方法的应用 | 第69-71页 |
| ·基于兔抗DEV UL18重组蛋白抗体介导的免疫酶组化和免疫荧光法检测UL18蛋白的应用 | 第71-73页 |
| ·免疫酶组化检测DEV UL18蛋白在组织分布方法的建立及应用 | 第71-72页 |
| ·免疫荧光法检测DEV UL18蛋白在组织分布方法的建立及应用 | 第72页 |
| ·间接免疫荧光与间接免疫酶组化检测DEV UL18蛋白在感染鸭体内分布比较 | 第72-73页 |
| ·基于免抗DEV UL18重组蛋白IgG介导的免疫荧光法检测UL18蛋白细胞定位 | 第73-74页 |
| ·关于蛋白在细胞内定位的检测方法 | 第73页 |
| ·疱疹病毒DEV UL18蛋白的细胞定位与其功能的关系 | 第73-74页 |
| 5 小结 | 第74页 |
| Abstract | 第74-75页 |
| 第四章 鸭肠炎病毒UL18基因在感染宿主细胞中的转录及表达特征 | 第75-87页 |
| 摘要 | 第75页 |
| 1 材料 | 第75-76页 |
| ·菌株、毒株和抗体 | 第75页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第75-76页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第75-76页 |
| ·Western blotting检测相关试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76页 |
| 2 方法 | 第76-80页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测DEV UL18基因在感染宿主细胞中的转录时相 | 第76-79页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计、合成及特异性检测 | 第76页 |
| ·鸭胚成纤维细胞(DEF)的培养 | 第76-77页 |
| ·DEV病毒的增值 | 第77页 |
| ·总RNA的提取 | 第77页 |
| ·DNA的去除 | 第77页 |
| ·RNA完整性及纯度检测 | 第77页 |
| ·反转录 | 第77-78页 |
| ·目的片段的PCR扩增及回收 | 第78页 |
| ·荧光定量PCR | 第78-79页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第79页 |
| ·数据处理与分析 | 第79页 |
| ·Western blotting检测DEV UL18在感染宿主细胞中的表达时相 | 第79-80页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的培养 | 第79页 |
| ·DEV病毒的增殖及采样 | 第79-80页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第80页 |
| ·Western blotting检测 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-84页 |
| ·DEV UL18基因在感染宿主细胞中的转录时相结果 | 第80-83页 |
| ·荧光定量PCR引物特异性检测 | 第80页 |
| ·RNA完整性及纯度检测 | 第80页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线 | 第80-82页 |
| ·DEV UL18基因在宿主细胞中的转录特征 | 第82-83页 |
| ·DEV UL18基因在感染宿主细胞中的表达时相结果 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-85页 |
| ·实时荧光定量PCR检测DEV UL18基因在DEF细胞中转录时相方法的选择 | 第84页 |
| ·DEV UL18基因的转录特征分析 | 第84-85页 |
| ·DEV UL18基因的表达特征分析 | 第85页 |
| 5 小结 | 第85页 |
| Abstract | 第85-87页 |
| 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 作者简介 | 第99页 |
