| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 縮略词 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-61页 |
| 1 梨基因克隆与表达特性研究进展 | 第17-27页 |
| ·已克隆的梨基因类型及其表达特性 | 第18-26页 |
| ·乙烯合成相关酶的基因 | 第18-19页 |
| ·乙烯信号传导途径中相关酶的基因 | 第19页 |
| ·与果实发育和成熟相关的基因 | 第19-21页 |
| ·与梨褐变有关的基因 | 第21页 |
| ·与色素合成相关的基因 | 第21-22页 |
| ·与抗病相关基因的基因 | 第22-23页 |
| ·与抗逆性相关的基因 | 第23页 |
| ·梨 S基因及其他 | 第23-26页 |
| ·展望 | 第26-27页 |
| 2 梨转基因研究进展 | 第27-37页 |
| ·梨转基因方法 | 第27-28页 |
| ·梨转基因所用的农杆菌菌株 | 第28-29页 |
| ·实现遗传转化的梨品种 | 第29页 |
| ·转化的基因 | 第29-36页 |
| ·报告基因 | 第29-30页 |
| ·提高非生物胁迫抗性 | 第30-31页 |
| ·提高生物胁迫抗性 | 第31-32页 |
| ·改善果实贮藏性及其品质 | 第32-33页 |
| ·其他 | 第33-36页 |
| ·问题与展望 | 第36-37页 |
| ·非基因型依赖的离体再生和遗传转化体系 | 第36页 |
| ·导入更多的优异基因或多价融合基因 | 第36页 |
| ·使用诱导型或组织特异型启动子 | 第36-37页 |
| ·深入全面研究转基因植株的特性 | 第37页 |
| 3 植物microRNAs的研究进展 | 第37-45页 |
| ·植物microRNAs的基本概况 | 第38-40页 |
| ·植物microRNAs的特点 | 第40-41页 |
| ·植物microRNAs的功能 | 第41-44页 |
| ·根的发育 | 第41-42页 |
| ·叶片的发育 | 第42页 |
| ·开花器官和开花时间的决定 | 第42-43页 |
| ·参与植物逆境胁迫和营养代谢 | 第43页 |
| ·参与自身代谢的反馈调节 | 第43-44页 |
| ·参与ta-siRNAs的形成 | 第44页 |
| ·果树microRNAs的研究概况 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-61页 |
| 第二章 砂梨ACC合酶cDNA全长克隆及其反义与正义表达载体构建 | 第61-77页 |
| 摘要 | 第61页 |
| Abstract | 第61-63页 |
| 1 材料和方法 | 第63-65页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·植物材料 | 第63页 |
| ·菌株和载体 | 第63页 |
| ·主要生化试剂 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·RNA提取与纯化 | 第64页 |
| ·cDNA合成 | 第64页 |
| ·cDNA 5'末端扩增 | 第64-65页 |
| ·cDNA的ORF扩增 | 第65页 |
| ·cDNA 3'末端扩增 | 第65页 |
| ·生物信息学分析 | 第65页 |
| ·表达载体的构建 | 第65页 |
| ·其他操作 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-72页 |
| ·总RNA提取与检测 | 第65-66页 |
| ·mRNA的纯化与反转录 | 第66页 |
| ·cDNA 5'末端的获得 | 第66-67页 |
| ·砂梨ACC合酶基因cDNA全长的获得 | 第67-69页 |
| ·砂梨ACC合酶氨基酸序列分析与结构预测 | 第69-71页 |
| ·ACC合酶cDNA正义与反义表达载体的构建 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 第三章 砂梨果实ACC氧化酶cDNA克隆及其反义表达载体构建 | 第77-89页 |
| 摘要 | 第77页 |
| Abstract | 第77-78页 |
| 1 材料与方法 | 第78-80页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·植物材料 | 第78页 |
| ·菌株和载体及主要试剂 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-80页 |
| ·RNA提取、纯化与cDNA合成 | 第79页 |
| ·保守片段的扩增 | 第79页 |
| ·3’和5’RACE的扩增 | 第79-80页 |
| ·生物信息学分析 | 第80页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-86页 |
| ·cDNA保守片段的扩增 | 第80-81页 |
| ·砂梨ACC氧化酶基因cDNA全长的获得 | 第81-83页 |
| ·砂梨ACC氧化酶推导氨基酸序列生物信息学分析与空间结构预测 | 第83-85页 |
| ·砂梨ACC氧化酶cDNA反义表达载体的构建 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-89页 |
| 第四章 砂梨Ppy-ACS和Ppy-ACO在不同果实发育期的表达分析及其对外源乙烯和1-MCP采后处理的响应 | 第89-99页 |
| 提要： | 第89页 |
| Abstract | 第89-90页 |
| 1 材料与方法 | 第90-92页 |
| ·材料 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-91页 |
| ·RNA提取和cDNA合成 | 第90-91页 |
| ·实时荧光qRT-PCR | 第91页 |
| ·数据处理 | 第91-92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-95页 |
| ·qRT-PCR引物的特异性扩增检测 | 第92页 |
| ·果实不同发育时期Ppy-ACS和Ppy-ACO基因的表达 | 第92-93页 |
| ·外源乙烯和1-MCP采后处理对砂梨Ppy-ACS和Ppy-ACO表达的影响 | 第93-95页 |
| 3 讨论 | 第95页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 第五章 砂梨XTH基因克隆及其在不同果实发育期的表达分析 | 第99-115页 |
| 摘要 | 第99页 |
| Abstract | 第99-101页 |
| 1 材料和方法 | 第101-102页 |
| ·植物材料 | 第101页 |
| ·基因克隆及其序列分析 | 第101-102页 |
| ·RNA提取、纯化与cDNA合成、PCR扩增等 | 第101-102页 |
| ·生物信息学分析 | 第102页 |
| ·不同发育时期果实中Ppy-XTH的表达分析 | 第102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-110页 |
| ·cDNA保守片段的获得 | 第102-103页 |
| ·Ppy-XTH基因全长cDNA序列的获得 | 第103-104页 |
| ·Ppy-XTH氨基酸序列分析 | 第104-107页 |
| ·Ppy-XTH氨基酸序列比对分析 | 第104页 |
| ·信号肽与蛋白定位分析 | 第104-105页 |
| ·酶分子特性与成熟蛋白的三维结构模拟与分析 | 第105-107页 |
| ·XTH的聚类分析 | 第107-109页 |
| ·与拟南芥、番茄的XTH序列的聚类分析 | 第107-108页 |
| ·Ppy-XTH与西洋梨、苹果和猕猴桃XTH序列的聚类分析 | 第108-109页 |
| ·Ppy-XTH在砂梨不同发育时期果实器官中的表达分析 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-115页 |
| 第六章 三个砂梨扩展蛋白基因cDNA全长克隆及其在果实生长发育期的表达分析 | 第115-127页 |
| 摘要 | 第115页 |
| Abstract | 第115-116页 |
| 1 材料和方法 | 第116-118页 |
| ·材料 | 第116-117页 |
| ·植物材料及取样 | 第116-117页 |
| ·主要试剂、RNA提取与mRNA纯化、cDNA合成 | 第117页 |
| ·方法 | 第117-118页 |
| ·EXP保守片段简并扩增 | 第117页 |
| ·3’末端和5’末端的扩增 | 第117-118页 |
| ·生物信息学分析 同第二章 | 第118页 |
| ·目的基因在砂梨果实不同发育时期的表达分析 | 第118页 |
| 2 结果与分析 | 第118-123页 |
| ·目的基因保守片段的获得 | 第118页 |
| ·目的基因cDNA全长序列 | 第118-120页 |
| ·Ppy-EXPs及其推导氨基酸的序列分析 | 第120-121页 |
| ·Ppy-EXPs的与其他物种的分子进化树 | 第121-123页 |
| ·Ppy-EXPs在果实不同发育时期的表达分析 | 第123页 |
| 3 讨论 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 第七章 砂梨成熟果实中保守microRNAs的生物芯片检测和表达microRNAs的靶基因预测 | 第127-137页 |
| 摘要 | 第127页 |
| Abstract | 第127-129页 |
| 1 材料与方法 | 第129页 |
| ·试材及总RNA提取 | 第129页 |
| ·MicroRNAs的芯片检测 | 第129页 |
| ·表达microRNAs靶基因的预测 | 第129页 |
| 2 结果与分析 | 第129-133页 |
| ·果实总RNA的提取 | 第129-130页 |
| ·成熟果实中表达的microRNAs | 第130-131页 |
| ·表达microRNAs靶基因的预测 | 第131-133页 |
| 3 讨论 | 第133-134页 |
| ·物种间microRNAs的保守性 | 第133-134页 |
| ·果实成熟期间内源激素与糖代谢的调控 | 第134页 |
| 参考文献 | 第134-137页 |
| 主要创新点 | 第137-139页 |
| 攻读博士期间主要的学术论文发表情况 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
