| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-20页 |
| 缩略词表 | 第20-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-39页 |
| ·益生菌 | 第21-27页 |
| ·益生菌概述 | 第21-22页 |
| ·益生菌的选择标准 | 第22页 |
| ·乳酸菌的黏附与定植 | 第22-24页 |
| ·乳酸菌抑制病原菌的黏附与定植 | 第24页 |
| ·乳酸菌在调节肠道上皮细胞免疫反应中的作用 | 第24-27页 |
| ·S层蛋白 | 第27-33页 |
| ·乳杆菌S层蛋白的特点 | 第28-30页 |
| ·乳杆菌S层蛋白与细胞壁作用方式 | 第30页 |
| ·乳杆菌S层蛋白的黏附功能 | 第30-31页 |
| ·乳杆菌S层蛋白的免疫刺激作用 | 第31-32页 |
| ·乳杆菌S层蛋白的应用 | 第32-33页 |
| ·益生菌的安全性评价 | 第33-34页 |
| ·益生菌的安全性 | 第33页 |
| ·益生菌安全性评价指导原则 | 第33-34页 |
| ·乳杆菌质粒表达系统 | 第34-36页 |
| ·乳杆菌作为异源表达宿主菌的优势 | 第34页 |
| ·乳杆菌中的质粒载体 | 第34页 |
| ·质粒载体调控元件 | 第34-36页 |
| ·基因工程乳杆菌的应用 | 第36页 |
| ·本文的立题依据及研究内容 | 第36-39页 |
| 第二章 高黏附乳杆菌的筛选及益生特性的体外评价 | 第39-57页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·高黏附乳杆菌的筛选 | 第39-40页 |
| ·高黏附乳杆菌菌种鉴定 | 第40-41页 |
| ·Lactobacillus crispatus对酸和胆盐的耐受性 | 第41页 |
| ·Lb.crispatus在人工胃肠液中的耐受性 | 第41-42页 |
| ·Lb.crispatus降解胆固醇的能力 | 第42页 |
| ·Lb.crispatus的自絮凝作用 | 第42页 |
| ·Lb.crispatus与有机溶剂结合实验(MATS) | 第42-43页 |
| ·Lb.crispatus表面酶学和化学处理 | 第43页 |
| ·透射电镜观察Lb.crispatus表面结构 | 第43页 |
| ·Lb.crispatus表层蛋白的提取 | 第43-44页 |
| ·纯化的S层蛋白抑制宿主菌对上皮细胞和胞外基质蛋白的黏附 | 第44页 |
| ·统计学分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-55页 |
| ·高黏附乳杆菌的筛选 | 第44-47页 |
| ·Lb.crispatus对酸和胆盐的耐受能力 | 第47页 |
| ·Lb.crispatus降解胆固醇能力 | 第47-48页 |
| ·Lb.crispatus表面性质及自絮凝能力 | 第48-49页 |
| ·Lb.crispatus K313和K243 S层蛋白的特点 | 第49-51页 |
| ·表层蛋白的酶学和化学分析 | 第51页 |
| ·Lb.crispatus的黏附分子鉴定 | 第51-53页 |
| ·卷曲乳杆菌S层蛋白的功能 | 第53-55页 |
| ·小结与讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 Lb.crispatus调控病原菌诱导HT-29细胞免疫反应的研究 | 第57-65页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·卷曲乳杆菌抑制沙门氏菌、大肠杆菌对肠道上皮细胞的黏附 | 第57-58页 |
| ·促炎症细胞因子转录水平分析 | 第58-59页 |
| ·细胞因子IL-8的表达水平分析 | 第59页 |
| ·益生菌和病原菌的共絮凝作用 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·卷曲乳杆菌对沙门氏菌、大肠杆菌黏附肠道上皮细胞的抑制作用 | 第60-61页 |
| ·Lb.crispatus对沙门氏菌感染所引起的炎症反应的抑制作用 | 第61-63页 |
| ·小结与讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 Lb.crispatus K313 S-layer蛋白相关功能域研究 | 第65-95页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-79页 |
| ·S-layer蛋白的分离 | 第67页 |
| ·S-layer蛋白基因的克隆 | 第67-71页 |
| ·S-layer蛋白基因序列分析 | 第71页 |
| ·S-layer蛋白基因转录分析 | 第71-73页 |
| ·重组载体构建 | 第73-74页 |
| ·大肠杆菌蛋白表达及纯化 | 第74-75页 |
| ·Lb.casei BL23中绿色荧光蛋白的测定 | 第75页 |
| ·qRT-PCR比较gfp的转录水平 | 第75页 |
| ·截断的SlpB对Lactobacillus crispatus K313细胞壁的结合 | 第75-77页 |
| ·截断的SlpB对乳酸菌细胞表面的结合 | 第77页 |
| ·截断的SlpB对胞外基质蛋白的结合 | 第77-78页 |
| ·SlpB中氨基酸的突变 | 第78-79页 |
| ·结果 | 第79-92页 |
| ·Lb.crispatus K313 S-layer蛋白基因的克隆及序列分析 | 第79-84页 |
| ·S-layer基因在Lb.crispatus K313中的表达模式 | 第84页 |
| ·slpB基因调控区分析 | 第84-87页 |
| ·slpB C-端功能研究 | 第87-89页 |
| ·slpB C端对不同乳杆菌细胞的结合能力 | 第89-90页 |
| ·slpB N-端功能研究 | 第90-92页 |
| ·小结与讨论 | 第92-95页 |
| 第五章 卷曲乳杆菌抗药性检测 | 第95-103页 |
| ·材料 | 第95-96页 |
| ·方法 | 第96-98页 |
| ·Lb.crispatus抗生素最小抑制浓度测定 | 第96页 |
| ·Lb.crispatus K313和K243抗生素抗性基因型分析 | 第96-97页 |
| ·四环素抗性基因的克隆 | 第97页 |
| ·接合转移实验 | 第97-98页 |
| ·结果 | 第98-100页 |
| ·Lb.crispatus K313和K243抗生素抗性分析 | 第98页 |
| ·Lb.crispatus K313四环素抗性基因克隆及系统进化分析 | 第98-100页 |
| ·Lb.crispatus K313和K243抗生素抗性的可转移性评价 | 第100页 |
| ·小结与讨论 | 第100-103页 |
| 第六章 乳杆菌表达载体构建 | 第103-119页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·方法 | 第104-108页 |
| ·乳杆菌中高拷贝质粒的筛选 | 第104-105页 |
| ·菌种鉴定 | 第105页 |
| ·pD403质粒的序列测序 | 第105页 |
| ·质粒pD403中各ORF的功能分析 | 第105-106页 |
| ·E coli/Lactobacillus穿梭克隆载体pCD4032的构建 | 第106页 |
| ·克隆载体pCD4032的宿主范围及稳定性分析 | 第106-107页 |
| ·乳杆菌表达载体pCD4033的构建 | 第107页 |
| ·荧光蛋白表达分析 | 第107-108页 |
| ·结果 | 第108-117页 |
| ·乳杆菌中高拷贝质粒的筛选 | 第108-109页 |
| ·质粒pD403的分子特点 | 第109-112页 |
| ·质粒pD403携带ORF的功能分析 | 第112-113页 |
| ·E.coli/Lactobacillus穿梭克隆载体pCD4032的构建 | 第113-115页 |
| ·表达载体pCD4033的构建 | 第115-117页 |
| ·小结与讨论 | 第117-119页 |
| 附录 | 第119-129页 |
| 附录一：本论文所使用的主要仪器 | 第119-120页 |
| 附录二：主要药品、试剂和培养基 | 第120-121页 |
| 附录三：主要溶液配方 | 第121-123页 |
| 附录四：乳杆菌染色体及质粒提取方法 | 第123-124页 |
| 附录五：乳杆菌电转化方法 | 第124-125页 |
| 附录六：E.coli诱导表达及His-tag蛋白纯化 | 第125-126页 |
| 附录七：TAIL-PCR原理 | 第126-129页 |
| 参考文献 | 第129-139页 |
| 攻读博士学位论文期间发表论文 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-142页 |
| 外文写作 | 第142-143页 |
| 附件 | 第143-173页 |
