| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10页 |
| 1 课题背景 | 第10-11页 |
| ·原发性肝癌的现状 | 第10页 |
| ·小鼠模型的应用 | 第10-11页 |
| ·显微注射法制备转基因小鼠 | 第11页 |
| ·实验动物的选择 | 第11页 |
| ·胚胎操作 | 第11页 |
| 2 研究现状 | 第11-15页 |
| ·细胞生长因子及其信号异常与肝癌靶向治疗 | 第11-12页 |
| ·新型肝细胞刺激因子HPPCn的发现 | 第12-13页 |
| ·HPPCn及其激活的信号系统与肝癌的关系 | 第13-14页 |
| ·HPPCn与肝癌发生发展的科学问题 | 第14-15页 |
| 第一章 高表达HPPCn转基因小鼠的鉴定 | 第15-31页 |
| 1 实验材料 | 第15-18页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·引物 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·仪器设备 | 第16页 |
| ·试剂配制 | 第16-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-25页 |
| ·PCR和Southern blot鉴定转基因小鼠 | 第18-22页 |
| ·PCR鉴定 | 第19-20页 |
| ·Southern blot鉴定 | 第20-22页 |
| ·Western blot检测His标签和HPPCn的表达 | 第22-23页 |
| ·小鼠肝脏总蛋白和各组织总蛋白的提取 | 第22页 |
| ·抗His标签和抗HPPCn肝脏和各组织总蛋白WB检测 | 第22-23页 |
| ·Realtime-PCR检测HPPCn mRNA的表达 | 第23-25页 |
| ·小鼠肝脏总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·Q-PCR检测小鼠肝脏总RNA中HPPCn相对表达量 | 第24-25页 |
| ·组织学检测 | 第25页 |
| 3 实验结果 | 第25-28页 |
| ·高表达HPPCn转基因小鼠的鉴定 | 第25-26页 |
| ·WB检测HPPCn在转基因阳性和阴性小鼠肝脏中的表达 | 第26-27页 |
| ·Q-PCR检测HPPCn mRNA在转基因阳性和阴性小鼠肝脏中的表达 | 第27页 |
| ·WB检测高表达HPPCn转基因小鼠在体内各组织表达特异性 | 第27-28页 |
| ·HPPCn高表达转基因小鼠肝脏组织病理学检测 | 第28页 |
| 4 讨论 | 第28-31页 |
| 第二章 转基因小鼠肝癌模型的诱导及其评价 | 第31-46页 |
| 1 实验材料 | 第31-34页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·仪器设备 | 第32-33页 |
| ·试剂配制 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-39页 |
| ·小鼠肝癌诱导建模操作步骤 | 第34-35页 |
| ·血液处理 | 第35页 |
| ·新鲜肝脏组织RNA提取及相关基因Q-PCR检测 | 第35-37页 |
| ·小鼠肝脏总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·Q-PCR检测小鼠肝脏总RNA中HPPCn相对表达量 | 第36-37页 |
| ·小鼠肝脏蛋白的提取及原癌基因和肿瘤标志物的WB检测 | 第37-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-44页 |
| ·小鼠肝癌诱导长期模型存活率 | 第39页 |
| ·肝脏损伤和肿瘤发生情况 | 第39-40页 |
| ·肝脏组织病理分析 | 第40-41页 |
| ·各组小鼠建模过程体重的变化 | 第41页 |
| ·血清中ALT的检测 | 第41-42页 |
| ·Q-PCR检测两组小鼠肝脏中HPPCn表达 | 第42页 |
| ·肿瘤标志物和原癌基因的检测 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 缩微词表 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-56页 |
| 作者简历 | 第56页 |
