| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第11-13页 |
| 第一部分:牛β干扰素基因的克隆、原核表达及毕赤酵母表达载体的构建 | 第13-48页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·干扰素简介 | 第13页 |
| ·干扰素的产生 | 第13-14页 |
| ·干扰素的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·抗病毒活性 | 第14页 |
| ·抗细胞增殖活性 | 第14-15页 |
| ·免疫调节活性 | 第15页 |
| ·干扰素作用机理 | 第15-20页 |
| ·信号转导及干扰素诱导基因的激活 | 第16-18页 |
| ·干扰素诱导蛋白 | 第18-20页 |
| ·干扰素与细胞调亡 | 第20页 |
| ·牛干扰素的研究进展 | 第20-21页 |
| ·干扰素的基因工程研究进展 | 第21-22页 |
| ·干扰素应用及其应用研究存在的问题 | 第22-25页 |
| ·干扰素的应用 | 第22-24页 |
| ·干扰素应用研究存在的问题 | 第24-25页 |
| 第2章 研究的目的及意义 | 第25-27页 |
| 第3章 材料与方法 | 第27-38页 |
| ·试验材料 | 第27-31页 |
| ·质粒与菌株 | 第27页 |
| ·生化试剂 | 第27-29页 |
| ·主要培养基 | 第29-30页 |
| ·缓冲液 | 第30页 |
| ·E.coli感受态制备用试剂 | 第30页 |
| ·Pichia pastoris感受态制备用试剂 | 第30-31页 |
| ·其它缓冲液 | 第31页 |
| ·试验方法 | 第31-38页 |
| ·牛外周血白细胞的分离及诱导培养 | 第31页 |
| ·牛β干扰素总RNA的提取 | 第31页 |
| ·RT-PCR扩增BoIFN-β | 第31-32页 |
| ·BoINF-β的生物信息学分析 | 第32页 |
| ·RT-PCR产物的回收与纯化 | 第32页 |
| ·RT-PCR产物的克隆 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第33页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第33页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第33-34页 |
| ·干扰素的原核表达 | 第34-35页 |
| ·干扰素的酵母表达 | 第35-37页 |
| ·酵母菌株的保存 | 第37-38页 |
| 第4章 结果与分析 | 第38-44页 |
| ·BoIFN-β的克隆及其原核表达 | 第38-42页 |
| ·BoIFN-β成熟肽序列的克隆、测序及序列分析 | 第38页 |
| ·BoINF-β的氨基酸序列同源性及UPGMA聚类分析树分析 | 第38-39页 |
| ·BoIFN-β三维结构预测 | 第39-40页 |
| ·BoIFN-β原核表达载体的构建 | 第40页 |
| ·BoIFN-β的诱导原核表达 | 第40-42页 |
| ·BoIFN-β的毕赤酵母表达 | 第42-44页 |
| ·重组穿梭质粒pPIC9K-mBoIFNB的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组mBoIFN-β酵母菌株的筛选 | 第43-44页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第44-48页 |
| ·BoIFN-β的表达 | 第44-46页 |
| ·BoIFN-β基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·BoIFN-β的原核表达 | 第45-46页 |
| ·BoIFN-β在P.pastoris中的表达系统的建立 | 第46页 |
| ·结论 | 第46-48页 |
| 第二部分:鸡传染性支气管炎病毒受体的进一步鉴定 | 第48-55页 |
| 第1章 研究的目的及意义 | 第48-49页 |
| 第2章 材料与方法 | 第49-52页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·毒株与鸡胚 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-52页 |
| ·组织样品总RNA的提取 | 第49页 |
| ·半定量RT-PCR | 第49-50页 |
| ·流式细胞术 | 第50-51页 |
| ·免疫组织化学 | 第51-52页 |
| 第3章 结果与分析 | 第52-54页 |
| ·鸡不同组织总RNA的提取 | 第52页 |
| ·半定量RT-PCR检测不同组织gAPN的表达丰度 | 第52页 |
| ·免疫组织化学 | 第52页 |
| ·流式细胞术检测gAPN的表达及不同组织和IBV的结合能力 | 第52-54页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
