| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 英文缩略表 | 第20-21页 |
| 第一部分 文献综述 | 第21-46页 |
| 第一章 肉鸡腹水综合征与肺动脉高压研究进展 | 第21-29页 |
| ·肉鸡腹水综合征(AS)发现简史 | 第21页 |
| ·肺动脉高压综合征(PHS) | 第21页 |
| ·肉鸡腹水综合征诱导方法 | 第21-22页 |
| ·低温、缺氧和高蛋白诱导处理 | 第21-22页 |
| ·饮水高钠诱导 | 第22页 |
| ·低温和三碘甲腺原氨酸(3,5,3-triiodothyronine,T3)诱导 | 第22页 |
| ·肉鸡腹水综合征主要症状和病理特征 | 第22-23页 |
| ·肉鸡腹水综合征主要症状 | 第22-23页 |
| ·肉鸡腹水综合征病理特征 | 第23页 |
| ·肉鸡腹水综合征发病原因 | 第23-25页 |
| ·遗传筛选因素 | 第23-24页 |
| ·环境因素 | 第24-25页 |
| ·低温 | 第24页 |
| ·缺氧 | 第24-25页 |
| ·饲料因素 | 第25页 |
| ·管理因素 | 第25页 |
| ·肉鸡腹水综合征防治措施 | 第25-29页 |
| ·对快速生长的肉鸡进行早期限饲 | 第26页 |
| ·调整日粮营养水平和饲喂方式 | 第26-27页 |
| ·提高管理水平 | 第27页 |
| ·改善饲养环境和加强科学管理 | 第27页 |
| ·合理控制光照 | 第27页 |
| ·日粮中维生素C、E和硒及L-精氨酸 | 第27-28页 |
| ·腹水综合征肉鸡综合治疗 | 第28-29页 |
| 第二章 胰岛素样生长因子研究进展 | 第29-38页 |
| ·胰岛素样生长因子的发现简史 | 第29页 |
| ·胰岛素样生长因子的结构组成 | 第29-30页 |
| ·胰岛素样生长因子受体 | 第30页 |
| ·胰岛素样生长因子结合蛋白及其功能 | 第30-32页 |
| ·胰岛素样生长因子1的结构和生物学作用 | 第32-36页 |
| ·胰岛素样生长因子1对小鼠成骨细胞增殖的影响 | 第32-33页 |
| ·胰岛素样生长因子1大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响 | 第33页 |
| ·IGF-1与肝脏疾病 | 第33-35页 |
| ·IGF-1与心脏 | 第35页 |
| ·IGF-Ⅰ与糖脂类代谢 | 第35-36页 |
| ·IGF-1与肿瘤 | 第36页 |
| ·IGF-2与生长发育的关系 | 第36-38页 |
| 第三章 ARC研究进展 | 第38-46页 |
| ·ARC蛋白发现简史和组织表达 | 第38-39页 |
| ·ARC蛋白发现简史 | 第38页 |
| ·ARC蛋白组织表达及其细胞分布定位 | 第38-39页 |
| ·ARC结构组成和功能 | 第39-40页 |
| ·ARC结构组成 | 第39-40页 |
| ·ARC蛋白功能 | 第40页 |
| ·ARC在机体发育和功能中的作用 | 第40-41页 |
| ·ARC在心脏疾病中的作用 | 第41-42页 |
| ·ARC相关的作用蛋白 | 第42-45页 |
| ·蛋白激酶CK2 | 第42-43页 |
| ·Caspase蛋白家族 | 第43页 |
| ·Bcl-2蛋白家族及Bax蛋白 | 第43-45页 |
| ·ARC蛋白抑制心肌肥大的调控通道 | 第45-46页 |
| 第二部分 试验研究 | 第46-124页 |
| 第四章 AS肉鸡模型建立及血液生化指标测定 | 第46-67页 |
| ·研究背景 | 第47-48页 |
| ·材料和方法 | 第48-56页 |
| ·实验动物 | 第48页 |
| ·试验材料 | 第48页 |
| ·试验仪器 | 第48-49页 |
| ·过氧化氢含量测定 | 第49页 |
| ·测定原理 | 第49页 |
| ·试剂组成与配置 | 第49页 |
| ·操作方法、 | 第49页 |
| ·数据技术方法 | 第49页 |
| ·过氧化氢酶(CAT)含量测定 | 第49-50页 |
| ·原理 | 第49-50页 |
| ·试剂组成与配置 | 第50页 |
| ·血清(血浆)检测操作步骤 | 第50页 |
| ·血清(血浆)中的过氧化氢酶活力测定公式 | 第50页 |
| ·丙二醛(MDA)测定 | 第50-51页 |
| ·丙二醛(MDA)测定原理 | 第50页 |
| ·试剂组成与配置 | 第50-51页 |
| ·操作流程表 | 第51页 |
| ·计算公式 | 第51页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)含量检测 | 第51-52页 |
| ·检测原理 | 第51页 |
| ·试剂组成与配置 | 第51-52页 |
| ·总SOD活力测定步骤 | 第52页 |
| ·SOD活力检测公式 | 第52页 |
| ·心肌组织形态学观察、检查 | 第52-54页 |
| ·心肌组织取材 | 第52-53页 |
| ·心肌组织固定 | 第53页 |
| ·心肌组织脱水透明 | 第53页 |
| ·心肌组织浸蜡包埋 | 第53页 |
| ·心肌组织切片修块、切片、粘片和烘片 | 第53页 |
| ·心肌组织脱蜡、染色、脱水透明和封片 | 第53-54页 |
| ·肉鸡腹水诊断 | 第54页 |
| ·心肌组织细胞凋亡检测(TUNEL) | 第54-55页 |
| ·凋亡检测原理 | 第54页 |
| ·试剂盒主要成分和所需试剂 | 第54-55页 |
| ·肉鸡腹水模型诱导方法建立 | 第55-56页 |
| ·实验设计 | 第55-56页 |
| ·试验结果 | 第56-57页 |
| ·血清中过氧化氢含量检测结果 | 第56页 |
| ·血清中过氧化氢酶(CAT)含量检测结果 | 第56页 |
| ·血清中丙二醛(MDA)含量测定 | 第56页 |
| ·血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量测定 | 第56页 |
| ·腹水模型诱导结果 | 第56-57页 |
| ·心肌组织切片病理学检测(HE染色) | 第57页 |
| ·心肌细胞凋亡检测 | 第57页 |
| ·TUNEL荧光法检测 | 第57页 |
| ·TUNEL DAB显色法检测 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-67页 |
| 第五章 ARC基因克隆与原核表达 | 第67-78页 |
| ·研究背景 | 第67-69页 |
| ·材料与方法 | 第69-75页 |
| ·实验动物 | 第69页 |
| ·主要实验材料 | 第69页 |
| ·主要仪器设备 | 第69-70页 |
| ·总RNA的提取和ARC基因扩增 | 第70-71页 |
| ·总RNA的提取 | 第70页 |
| ·RT-PCR扩增小鼠ARC基因 | 第70-71页 |
| ·重组表达载体pESATTM-E1-ARC构建 | 第71-72页 |
| ·感受态菌的制备 | 第72页 |
| ·重组质粒的转化 | 第72-73页 |
| ·重组质粒的小量制备(碱裂解法) | 第73页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第73页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第73-74页 |
| ·重组表达菌的诱导 | 第74页 |
| ·表达蛋白检测 | 第74-75页 |
| ·SDS-PAGE样品的制备 | 第74页 |
| ·聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75页 |
| ·RNA的提取 | 第75页 |
| ·ARC基因的扩增和克隆 | 第75页 |
| ·重组表达载体pESATTM-E1-ARC序列测定 | 第75页 |
| ·表达产物SDS—PAGE电泳 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| 第六章 IGF-1与ARC作用关系研究 | 第78-94页 |
| ·研究背景 | 第78-79页 |
| ·材料与方法 | 第79-87页 |
| ·试验材料 | 第79页 |
| ·主要试验试剂及配置 | 第79-82页 |
| ·主要试验仪器和设备 | 第82-83页 |
| ·H9C2大鼠心肌细胞的传代培养 | 第83页 |
| ·细胞免疫荧光步骤 | 第83-84页 |
| ·细胞活性测定(台盼蓝技术法)原理,材料及操作步骤 | 第84页 |
| ·原理和材料 | 第84页 |
| ·细胞计数操作步骤 | 第84页 |
| ·细胞蛋白提取及蛋白含量测定操作步骤 | 第84-86页 |
| ·细胞蛋白提取操作步骤 | 第84-85页 |
| ·细胞蛋白含量的测定 | 第85-86页 |
| ·免疫印迹分析 | 第86页 |
| ·SDS-PAGE样品的制备(见第五章5.2.12.1) | 第86页 |
| ·聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)(见第五章5.2.12.2) | 第86页 |
| ·免疫印记分析 | 第86页 |
| ·ARC基因siRNA设计及其转染 | 第86-87页 |
| ·siRNA设计 | 第86-87页 |
| ·siRNA转染 | 第87页 |
| ·实验结果 | 第87-88页 |
| ·过氧化氢对H9C2大鼠心肌细胞中ARC蛋白表达量及RNAi存在条件下细胞死亡率的影响 | 第87页 |
| ·IGF-1对ARC蛋白表达的影响 | 第87页 |
| ·免疫荧光分析过氧化氢及IGF-1对ARC蛋白表达的影响 | 第87-88页 |
| ·H9C2大鼠心肌细胞在不多处理条件下ARC蛋白水平的分析及细胞活性的影响 | 第88页 |
| ·IGF-1是否通过PI3K途径调控ARC表达 | 第88页 |
| ·讨论 | 第88-94页 |
| 第七章 鸡胚心肌细胞培养、鉴定及活性测定 | 第94-104页 |
| ·研究背景 | 第94-95页 |
| ·材料与方法 | 第95-99页 |
| ·试验材料 | 第95页 |
| ·主要试剂及配置 | 第95-96页 |
| ·主要试验仪器和设备 | 第96-97页 |
| ·鸡胚心肌细胞培养方法及步骤 | 第97页 |
| ·组织块贴壁法 | 第97页 |
| ·胶原酶消化法 | 第97页 |
| ·心肌细胞免疫组化法鉴定 | 第97-98页 |
| ·MTT法测定心肌细胞活性 | 第98-99页 |
| ·MTT溶液的配制方法 | 第98页 |
| ·MTT检测步骤 | 第98-99页 |
| ·试验结果 | 第99-100页 |
| ·组织块贴壁法心肌细胞培养 | 第99页 |
| ·胶原酶消化法心肌细胞培养 | 第99页 |
| ·原代鸡胚心肌细胞免疫组织化学法鉴定 | 第99页 |
| ·MTT法检测心肌细胞增殖情况 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-104页 |
| 第八章 ARC对心肌细胞抗凋亡作用研究 | 第104-124页 |
| ·研究背景 | 第105-106页 |
| ·材料与方法 | 第106-112页 |
| ·实验动物 | 第106页 |
| ·实验材料和试剂 | 第106-108页 |
| ·实验仪器设备 | 第108页 |
| ·鸡胚原代心肌细胞培养 | 第108页 |
| ·pcDNA3.1/ARC重组质粒构建 | 第108-109页 |
| ·ARC基因的提取扩增 | 第108页 |
| ·重组质粒的构建 | 第108-109页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第109页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第109页 |
| ·pcDNA3.1/ARC重组质粒脂质体转染原理和步骤 | 第109-110页 |
| ·转染原理 | 第109-110页 |
| ·转染步骤 | 第110页 |
| ·细胞免疫荧光 | 第110-111页 |
| ·AO/EB染色 | 第111页 |
| ·染色原理 | 第111页 |
| ·AO/EB染色及结果观察 | 第111页 |
| ·半定量荧光PCR | 第111-112页 |
| ·免疫印迹 | 第112页 |
| ·试验结果 | 第112-114页 |
| ·心肌细胞培养结果 | 第112页 |
| ·ARC基因扩增和测序结果 | 第112页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第112-113页 |
| ·pcDNA3.1/ARC脂质体转染 | 第113页 |
| ·鸡胚心肌细胞中ARC潜在相关作用基因扩增 | 第113页 |
| ·荧光定量PCR相关基因检测的扩增曲线及溶解曲线 | 第113页 |
| ·免疫荧光法定位外源性的ARC蛋白表达、免疫印迹及ARC siRNA功能检测 | 第113页 |
| ·在不同时间过氧化氢以及外源性ARC蛋白处理条件下,心肌细胞的凋亡情况 | 第113-114页 |
| ·外源性的ARC蛋白对caspase-9,caspase-8, caspase-3,caspase-2,XIAP,bcl-2, cytochrome-c等相关基因表达的影响 | 第114页 |
| ·免疫印迹法检测XIAP,bcl-2,caspase-3蛋白表达水平 | 第114页 |
| ·外源性ARC蛋白抑制心肌细胞凋亡能力以及其调控凋亡的途径检测 | 第114页 |
| ·讨论 | 第114-124页 |
| 参考文献 | 第124-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 论文发表情况 | 第143页 |
| 学术交流情况 | 第143页 |
