| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-12页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| ·钙调蛋白 | 第12-25页 |
| ·钙离子结合蛋白的分类 | 第12-13页 |
| ·钙调蛋白的结构及生理生化特点 | 第13-14页 |
| ·钙-钙离子结合蛋白信号传导系统 | 第14-15页 |
| ·钙作为第二信使的作用特点 | 第14页 |
| ·钙-钙调蛋白信号系统的主要激活方式 | 第14-15页 |
| ·钙调蛋白的表达特点 | 第15-17页 |
| ·主要功能 | 第17-25页 |
| ·反义技术 | 第25-27页 |
| ·反义DNA | 第26页 |
| ·核酶 | 第26页 |
| ·反义RNA | 第26-27页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 2 钙调蛋白基因cDNA的克隆 | 第28-42页 |
| ·材料和试剂 | 第28-29页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-31页 |
| ·总RNA的提取及检测 | 第29-31页 |
| ·异硫氰酸胍法提取总RNA | 第29-30页 |
| ·CTAB硼砂法提取总RNA | 第30-31页 |
| ·SDS酸酚法提取总RNA | 第31页 |
| ·总核酸提取法提取总RNA | 第31页 |
| ·植物总RNA电泳检测和紫外分光光度法检测 | 第31页 |
| ·RNA反转录 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR扩增目的片断 | 第32-33页 |
| ·引物 | 第32页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·连入克隆载体 | 第33-36页 |
| ·目的片断的回收 | 第33页 |
| ·目的片断与T载体的连接 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物转入感受态细胞 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第35-36页 |
| ·抗生素及蓝白斑筛选 | 第35页 |
| ·提取少量质粒DNA | 第35页 |
| ·PCR鉴定 | 第35-36页 |
| ·正交PCR法 | 第36页 |
| ·PCR产物测序 | 第36页 |
| ·序列分析 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-42页 |
| ·总RNA提取 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR产物电泳检测 | 第38页 |
| ·正交PCR检测PCR各组分影响 | 第38页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第38页 |
| ·丹参钙调蛋白基因全长cDNA序列及其推导出的蛋白质序列 | 第38-42页 |
| 3 丹参钙调蛋白基因植物反义表达载体的构建及转化农杆菌 | 第42-47页 |
| ·材料和试剂 | 第42-43页 |
| ·菌株和载体 | 第42页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-47页 |
| ·酶切位点的设计 | 第43-44页 |
| ·双酶切克隆载体和植物表达载体 | 第44页 |
| ·回收目的片断 | 第44页 |
| ·连接目的基因和植物表达载体 | 第44-45页 |
| ·连接产物的转化 | 第45页 |
| ·阳性表达载体的克隆 | 第45页 |
| ·表达载体酶切检测和PCR检测 | 第45-46页 |
| ·植物表达载体质粒的提取 | 第46页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第46页 |
| ·含目的基因的植物表达载体转化感受态农杆菌 | 第46-47页 |
| ·PCR快速鉴定阳性农杆菌菌落 | 第47页 |
| ·结果 | 第47页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第47页 |
| ·PCR检测结果 | 第47页 |
| 4 丹参钙调蛋白基因的拷贝数测定 | 第47-54页 |
| ·材料和试剂 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·试验方法 | 第49-53页 |
| ·CTAB法抽提植物总DNA | 第49页 |
| ·植物总DNA限制性酶切 | 第49-50页 |
| ·Southern凝胶电泳及凝胶中DNA变性 | 第50-51页 |
| ·凝胶转膜及固定 | 第51页 |
| ·地高辛探针的标记和检测 | 第51-52页 |
| ·杂交 | 第52-53页 |
| ·显色 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-54页 |
| 5 豇豆钙调蛋白基因cDNA的克隆 | 第54-58页 |
| ·材料和试剂 | 第54页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·方法 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| 6 讨论 | 第58-69页 |
| ·钙调蛋白基因分析 | 第58-63页 |
| ·钙调蛋白氨基酸序列中EF-hand结构分析 | 第58-59页 |
| ·丹参钙调蛋白cDNA推导的氨基酸特点 | 第59-61页 |
| ·钙调蛋白疏水性和亲水性分析 | 第61-63页 |
| ·提取丹参、豇豆总RNA的影响因素 | 第63-64页 |
| ·PCR扩增基因的影响因素 | 第64-65页 |
| ·小量提取质粒的注意点 | 第65页 |
| ·载体酶切位点的选择 | 第65-66页 |
| ·Southern杂交注意点 | 第66-68页 |
| ·植物总DNA提取过程中的影响因素 | 第66页 |
| ·酶切总DNA和凝胶电泳过程中的注意点 | 第66-67页 |
| ·转膜过程的注意点 | 第67-68页 |
| ·标记地高辛探针的注意点 | 第68页 |
| ·提取丹参RNA和DNA的比较 | 第68-69页 |
| 总结 | 第69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第77页 |