| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| ·东方马脑炎概述 | 第14-20页 |
| ·EEEV的分类地位与病原学特征 | 第14-15页 |
| ·EEEV基因组的结构特征与编码的蛋白质及其生物学功能 | 第15-17页 |
| ·EEEV的生态学与流行病学 | 第17-18页 |
| ·EEEV的分子进化 | 第18页 |
| ·EEE的临床症状、病理变化以及致病性研究 | 第18-20页 |
| ·EEE的鉴别诊断 | 第20页 |
| ·EEE的预防与治疗现状 | 第20页 |
| ·甲病毒属病毒E2蛋白抗原表位的研究进展及其应用价值 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 东方马脑炎病毒E2蛋白的原核表达与鉴定 | 第22-27页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·基因、质粒、菌株及主要试剂 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·EEEV E2基因的克隆鉴定 | 第22页 |
| ·EEEV E2蛋白的原核表达载体构建 | 第22-23页 |
| ·E2蛋白的原核表达以及SDS-PAGE鉴定 | 第23页 |
| ·原核表达重组E2蛋白的纯化与Western blot鉴定 | 第23-24页 |
| ·实验结果 | 第24-25页 |
| ·E2基因的PCR扩增 | 第24页 |
| ·重组质粒pET-E2的鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组E2蛋白表达的SDS-PAGE鉴定 | 第25页 |
| ·重组E2蛋白的纯化与鉴定 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 东方马脑炎病毒E2蛋白的真核表达与鉴定以及E2基因真核质粒的构建 | 第27-35页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·基因、菌株、质粒及主要试剂 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·EEEV E2基因的扩增 | 第27页 |
| ·E2基因重组杆状病毒穿梭载体pFast-E2与真核质粒pShuttle-E2的构建 | 第27-28页 |
| ·重组杆粒的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| ·含有E2基因的重组杆状病毒的获得与扩增 | 第29-30页 |
| ·E2基因在Sf9细胞中的表达与SDS-PAGE分析 | 第30页 |
| ·重组杆状病毒BACV-E2的大量扩增与重组E2蛋白的纯化 | 第30页 |
| ·真核表达重组E2蛋白的鉴定 | 第30-31页 |
| ·实验结果 | 第31-33页 |
| ·E2基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·重组质粒pFast-E2与pShuttle-E2的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组杆粒BAC-E2的鉴定 | 第32页 |
| ·重组E2蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第32页 |
| ·重组杆状病毒BACV-E2的扩增与重组E2蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·真核表达重组E2蛋白的纯化与鉴定 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 东方马脑炎病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第35-46页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·利用真核表达纯化的E2蛋白免疫小鼠 | 第35页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第35页 |
| ·细胞融合 | 第35-37页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第37页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养、冻存、克隆纯化和复苏 | 第37页 |
| ·MAbs腹水的制备 | 第37-38页 |
| ·MAbs及杂交瘤细胞特性的鉴定 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-45页 |
| ·间接ELISA检测方法的确立 | 第39-40页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的获得 | 第40页 |
| ·Western blot鉴定 | 第40页 |
| ·重组杆状病毒感染Sf9细胞IFA鉴定 | 第40页 |
| ·真核表达质粒pShuttle-E2转染BHK-21 IFA鉴定 | 第40页 |
| ·MAbs亚类鉴定 | 第40页 |
| ·MAbs上清与腹水效价测定及杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第40-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 东方马脑炎病毒E2蛋白抗原表位鉴定 | 第46-55页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·质粒、菌株 | 第46页 |
| ·主要试剂及仪器设备同2.1 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·原核表达E2蛋白部分重叠的42条短肽 | 第46-49页 |
| ·抗原表位的初步鉴定 | 第49页 |
| ·抗原表位的特异性鉴定 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-54页 |
| ·42 条短肽的原核表达 | 第49-50页 |
| ·抗原表位的初步鉴定 | 第50-51页 |
| ·抗原表位的特异性鉴定 | 第51-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
