| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-28页 |
| ·木质素的生物降解 | 第11-12页 |
| ·木质素的生物降解研究现状 | 第11页 |
| ·木质素的生物降解研究的目的及意义 | 第11页 |
| ·木质素降解体系 | 第11-12页 |
| ·木质素过氧化物酶 | 第12-14页 |
| ·木质素过氧化物酶同功酶的物理及酶学特性 | 第12-13页 |
| ·木质素过氧化物酶发酵条件的研究 | 第13页 |
| ·木质素过氧化物酶的降解机制 | 第13-14页 |
| ·Lip基因的研究 | 第14-15页 |
| ·Lip基因的结构 | 第14-15页 |
| ·Lip基因的表达调控 | 第15页 |
| ·木质素过氧化物酶的异源表达 | 第15-16页 |
| ·锰过氧化物酶 | 第16-17页 |
| ·锰过氧化物酶的基本特性与作用机理 | 第16页 |
| ·锰过氧化物酶的同源表达和异源表达 | 第16-17页 |
| ·酵母表达系统 | 第17-26页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第18-24页 |
| ·影响外源基因在酵母中表达的因素 | 第24-26页 |
| ·本论文的立题依据及研究内容 | 第26-27页 |
| ·立题依据 | 第26页 |
| ·主要研究内容 | 第26-27页 |
| ·论文撰写说明 | 第27-28页 |
| 第二章 包含信号肽的LipH8基因在甲醇毕赤酵母中的表达 | 第28-67页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-30页 |
| ·培养基和溶液 | 第30-33页 |
| ·主要仪器和设备 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-49页 |
| ·木质素过氧化物酶基因的克隆 | 第34-38页 |
| ·克隆载体pUC19-lipH8的构建及转化大肠杆菌 | 第38-42页 |
| ·表达载体pMETA-lipH8的构建及转化甲醇毕赤酵母 | 第42-44页 |
| ·转化子的鉴定 | 第44-48页 |
| ·工程菌菌种特性的研究及表达优化 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-66页 |
| ·出发菌株菌种特性研究 | 第49页 |
| ·引物的设计 | 第49-50页 |
| ·黄孢原毛平革菌的总RNA的提取 | 第50页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pUC19-lipH8的构建及转化大肠杆菌 | 第51-53页 |
| ·表达载体pMETA-lipH8的构建 | 第53-57页 |
| ·表达载体pMETA-lipH8转化PichiamethanolicapMAD16 | 第57-59页 |
| ·甲醇毕赤酵母PMAD16电转化条件的优化 | 第59-62页 |
| ·pMETA-lipH8的酵母转化子的筛选与鉴定 | 第62-65页 |
| ·工程菌菌株特性的研究 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 第三章 去自身信号肽的LipH8基因在甲醇毕赤酵母中的表达 | 第67-81页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·引物 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67-68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·去信号肽木质素过氧化物酶基因lipH8的克隆 | 第68页 |
| ·克隆载体pUC19-lipH8-ss的构建及转化大肠杆菌 | 第68-69页 |
| ·表达载体pMETαA—lipH8-ss的构建 | 第69页 |
| ·重组质粒pMETαA-lipH8—ss的线性化及纯化 | 第69页 |
| ·电转化Pichia methanolica以及鉴定 | 第69页 |
| ·转化子的诱导表达以及表达蛋白的电泳 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-80页 |
| ·木质素过氧化物酶基因的克隆 | 第69-70页 |
| ·重组质粒pUC19-lipH8-ss的构建及转化大肠杆菌 | 第70-72页 |
| ·表达载体pMETαA-lipH8的构建 | 第72-76页 |
| ·表达载体pMETαA-lipH8-ss转化Pichia methanolica pMAD16 | 第76-79页 |
| ·工程菌pMETαA-LipO8菌株特性的研究 | 第79-80页 |
| ·本章小结 | 第80-81页 |
| 第四章 pMETαA-lipO8表达木质素过氧化物酶发酵条件和培养基的优化 | 第81-96页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·实验材料 | 第81-82页 |
| ·菌株 | 第81页 |
| ·培养基 | 第81-82页 |
| ·实验方法 | 第82-85页 |
| ·菌种的活化 | 第82页 |
| ·不同葡萄糖浓度对木质素过氧化物酶表达量的影响 | 第82-83页 |
| ·表达条件的优化 | 第83页 |
| ·麦芽汁的制备 | 第83页 |
| ·高温浸提液的制备 | 第83页 |
| ·麦芽汁摇瓶培养工艺 | 第83-84页 |
| ·无机盐培养基培养pMETαA-lipO8的研究 | 第84-85页 |
| ·pMETαA-lipO8工程菌发酵罐放大培养 | 第85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-95页 |
| ·一步法发酵培养基葡萄糖浓度的确定 | 第85-86页 |
| ·表达条件的优化 | 第86-88页 |
| ·麦芽汁和麦芽高温浸提汁的制备 | 第88页 |
| ·不同糖度的麦芽汁对细胞增殖的影响 | 第88-89页 |
| ·不同糖度的麦芽汁对产酶的影响 | 第89页 |
| ·不同培养基和发酵方法对产酶的影响 | 第89-90页 |
| ·不同料水比的高温浸提液对产酶的影响 | 第90页 |
| ·pMETαA-lipO8工程菌产酶曲线的绘制 | 第90-91页 |
| ·无机盐培养基培养pMETαA-lipO8的研究 | 第91-92页 |
| ·pMETαA-lipO8发酵罐放大培养 | 第92-95页 |
| ·本章小结 | 第95-96页 |
| 第五章 去自身信号肽的mnp2基因在甲醇毕赤酵母中的表达 | 第96-105页 |
| ·引言 | 第96页 |
| ·实验材料 | 第96-97页 |
| ·菌株与质粒 | 第96页 |
| ·引物 | 第96页 |
| ·主要试剂 | 第96-97页 |
| ·实验方法 | 第97-98页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第97页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第97-98页 |
| ·电转化甲醇毕赤酵母 | 第98页 |
| ·mnp2在酵母中的诱导表达 | 第98页 |
| ·锰过氧化物酶活力测定 | 第98页 |
| ·结果与讨论 | 第98-104页 |
| ·锰过氧化物酶基因的克隆与表达 | 第98-104页 |
| ·本章小结 | 第104-105页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第105-114页 |
| ·全文总结 | 第105-106页 |
| ·本论文创新点 | 第106页 |
| ·展望 | 第106-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第115-116页 |
| 附图 | 第116-119页 |
