中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-7页 |
1 前言 | 第7-21页 |
1.1 白桦的地理分布及国内外白桦分子生态学研究现状 | 第7-8页 |
1.2 热激反应中的热激蛋白及热激蛋白基因 | 第8-16页 |
1.2.1 热激蛋白及热激蛋白基因的种类 | 第8页 |
1.2.2 热激蛋白的特性 | 第8-9页 |
1.2.3 植物中热激蛋白及热激蛋白基因的表达 | 第9-12页 |
1.2.4 植物小分子量热激蛋白(sHSP) | 第12-14页 |
1.2.5 热激蛋白在生态适应和进化中的作用及研究进展 | 第14-16页 |
1.3 真核生物mRNA差异显示技术(Differential Display)的研究进展 | 第16-20页 |
1.3.1 mRNA差异显示PCR技术的原理 | 第16-17页 |
1.3.2 mRNA差异显示PCR技术的应用 | 第17-18页 |
1.3.3 mRNA差异显示PCR技术的改进 | 第18-20页 |
1.4 研究目的和意义 | 第20-21页 |
2 热激处理对白桦温度适应的影响 | 第21-30页 |
2.1 实验材料 | 第21页 |
2.2 实验设计 | 第21-22页 |
2.2.1 不同温度的热激处理 | 第21-22页 |
2.2.2 不同温度的热激处理对白桦幼苗耐冷性的影响 | 第22页 |
2.2.3 高温预处理对白桦幼苗耐热性的影响 | 第22页 |
2.3 研究内容 | 第22-23页 |
2.3.1 膜相对透性的测定 | 第22页 |
2.3.2 丙二醛含量的测定 | 第22-23页 |
2.4 实验结果 | 第23-27页 |
2.4.1 不同高温条件下白桦叶片质膜透性的变化 | 第23-24页 |
2.4.2 不同温度预处理对白桦幼苗耐冷性的影响 | 第24-26页 |
2.4.3 高温预处理对白桦幼苗耐热性的影响 | 第26-27页 |
2.5 讨论 | 第27-30页 |
3 mRNA差异显示技术在白桦热激反应中的应用 | 第30-58页 |
3.1 实验材料 | 第30-31页 |
3.1.1 白桦组织来源 | 第30页 |
3.1.2 仪器与试剂 | 第30-31页 |
3.1.3 备用溶液配制 | 第31页 |
3.2 实验方法 | 第31-38页 |
3.2.1 白桦叶片组织总RNA的提取 | 第31-32页 |
3.2.2 白桦叶片组织总RNA的纯化 | 第32-33页 |
3.2.3 白桦mRNA差异显示PCR(DD-RT PCR)实验体系的建立 | 第33-35页 |
3.2.4 利用5'特异性引物进行的白桦mRNA差异显示PCR | 第35-36页 |
3.2.5 非变性聚丙烯酰胺凝胶分离差异片段 | 第36页 |
3.2.6 差异片段的回收 | 第36页 |
3.2.7 回收片段的克隆 | 第36-38页 |
3.2.8 克隆片段的序列测定分析 | 第38页 |
3.2.9 差异片段碱基序列与GenBank序列同源性比较 | 第38页 |
3.3 结果和讨论 | 第38-58页 |
3.3.1 几种白桦叶片组织总RNA提取方法的比较 | 第38-40页 |
3.3.2 白桦mRNA差异显示PCR(DD-RT PCR)实验体系的建立 | 第40-43页 |
3.3.3 正常白桦叶片组织与热激白桦叶片组织基因表达差异图谱 | 第43-50页 |
3.3.4 利用5'端特异性引物展示正常和热激白桦叶片组织基因表达差异图谱 | 第50-51页 |
3.3.5 回收片段的PCR扩增结果 | 第51页 |
3.3.6 克隆质粒PCR鉴定结果 | 第51-52页 |
3.3.7 克隆片段的序列分析结果 | 第52-57页 |
3.3.8 差异片段核苷酸序列与GenBank数据库同源性比较结果 | 第57-58页 |
4 讨论 | 第58-63页 |
4.1 最佳白桦热激反应体系的建立 | 第58-59页 |
4.2 高温预处理对白桦耐冷性的影响 | 第59页 |
4.3 影响DD-RT PCR技术的几个关键问题 | 第59-61页 |
4.3.1 RNA的质和量 | 第60页 |
4.3.2 cDNA第一链合成的锚定引物 | 第60页 |
4.3.3 假阳性差异 | 第60页 |
4.3.4 差异片段回收中存在的问题 | 第60-61页 |
4.4 有关聚丙烯酰胺凝胶银染技术在分子生物学中应用的建议 | 第61-63页 |
5 结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-74页 |
致谢 | 第74页 |