| 提要 | 第1-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一篇文献综述 | 第13-53页 |
| 第一章 蓖麻毒素的结构与作用机理 | 第13-31页 |
| 1 蓖麻毒素的发现 | 第14-15页 |
| 2 蓖麻毒素的理化性质 | 第15-16页 |
| 3 蓖麻毒素的结构和功能 | 第16-21页 |
| 4 蓖麻毒素毒性 | 第21-22页 |
| 5 蓖麻毒素作用机理 | 第22-25页 |
| 6 蓖麻毒素生物合成 | 第25-26页 |
| 7 蓖麻毒素中毒的临床症状和治疗 | 第26-27页 |
| 8 蓖麻毒素的应用 | 第27-31页 |
| 第二章 蓖麻毒素在细胞内的逆向转运途径研究进展 | 第31-41页 |
| 1 蓖麻毒素在哺乳动物细胞内的转运途径 | 第31-40页 |
| ·蓖麻毒素与细胞膜的结合 | 第31-32页 |
| ·蓖麻毒素的内吞 | 第32-36页 |
| ·蓖麻毒素从内涵体转运到高尔基体 | 第36-37页 |
| ·蓖麻毒素从高尔基体向内质网的逆向转运 | 第37-39页 |
| ·蓖麻毒素易位进入胞浆并发挥作用 | 第39-40页 |
| 2 蓖麻毒素在其他系统中的转运途径 | 第40-41页 |
| 第三章 蛋白质相互作用研究进展 | 第41-53页 |
| 1 基于生物化学、微生物学、分子生物学的经典研究方法 | 第41-45页 |
| ·化学交联法 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白pull-down 实验 | 第42页 |
| ·免疫共沉淀 | 第42-43页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第43页 |
| ·融合蛋白亲和色谱法 | 第43-44页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第44-45页 |
| 2 基于生物物理学的研究方法 | 第45-47页 |
| ·荧光共振能量转移技术 | 第45-46页 |
| ·表面等离子体共振 | 第46-47页 |
| ·原子作用力显微技术 | 第47页 |
| 3 基于计算分析和构建相互作用模型的方法 | 第47-48页 |
| ·全基因组计算分析法 | 第47-48页 |
| ·构建相互作用模型法 | 第48页 |
| 4 蛋白质相互作用研究方法的新进展 | 第48-53页 |
| ·串联亲和纯化技术 | 第48-49页 |
| ·蛋白质片段互补分析 | 第49-50页 |
| ·蛋白质芯片 | 第50页 |
| ·微量热技术 | 第50-53页 |
| 第二篇 研究内容 | 第53-131页 |
| 实验一 EDEM2 对蓖麻毒素从内质网向胞浆逆向转运的影响 | 第53-75页 |
| 1 材料与方法 | 第54-65页 |
| 2 结果 | 第65-71页 |
| ·真核表达载体的大量提取与纯化 | 第65页 |
| ·目的蛋白的表达与鉴定 | 第65-66页 |
| ·细胞毒性检测 | 第66-70页 |
| ·蓖麻毒素和EDEM2 的免疫共沉淀 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-74页 |
| ·关于转染的影响因素 | 第71-72页 |
| ·关于MTS 检测 | 第72-73页 |
| ·蓖麻毒素与EDEM2 的关系 | 第73-74页 |
| 4 小结 | 第74-75页 |
| 实验二 逆向转运过程中ARFRP1 与蓖麻毒素相互作用的研究 | 第75-91页 |
| 1 材料与方法 | 第76-85页 |
| 2 结果 | 第85-88页 |
| ·真核表达载体的大量提取与纯化 | 第85页 |
| ·目的蛋白的表达与鉴定 | 第85-86页 |
| ·细胞毒性检测 | 第86-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 4 小结 | 第90-91页 |
| 实验三 ERp29 真核表达载体的构建 | 第91-109页 |
| 1 材料和方法 | 第92-100页 |
| 2 结果 | 第100-102页 |
| ·小鼠肝组织总RNA 的提取 | 第100页 |
| ·RT-PCR | 第100页 |
| ·pMD18-T-ERp29 克隆载体的构建 | 第100-101页 |
| ·pcDNA3-ERp29-HA 表达载体的构建 | 第101-102页 |
| 3 讨论 | 第102-108页 |
| ·小鼠肝脏总RNA 的提取及RT-PCR | 第102-104页 |
| ·pMD18-T-ERp29 克隆载体的构建 | 第104-106页 |
| ·pcDNA3-ERp29-HA 表达载体的构建 | 第106-108页 |
| 4 小结 | 第108-109页 |
| 实验四 蓖麻毒素细胞内逆向转运过程中ERp29 蛋白的作用 | 第109-131页 |
| 1 材料与方法 | 第110-119页 |
| 2 结果 | 第119-124页 |
| ·目的蛋白的表达与鉴定 | 第119页 |
| ·细胞毒性检测 | 第119-121页 |
| ·RNAi 及细胞毒性检测 | 第121-123页 |
| ·蓖麻毒素与ERp29 及Sec61α的免疫共沉淀 | 第123-124页 |
| 3 讨论 | 第124-130页 |
| ·关于RNAi | 第124-125页 |
| ·关于免疫共沉淀 | 第125-127页 |
| ·蓖麻毒素与ERp29 | 第127-130页 |
| 4 小结 | 第130-131页 |
| 结论 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-153页 |
| 攻博期间发表的学术论文 | 第153-154页 |
| 中文摘要 | 第154-159页 |
| 英文摘要 | 第159-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
| 导师简介 | 第166-167页 |
| 作者简介 | 第167页 |
