摘要 | 第1-4页 |
ABSTRACT | 第4-9页 |
前言 | 第9-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-19页 |
·THAP 家族蛋白质研究进展 | 第11-15页 |
·THAP 结构域特征 | 第11-12页 |
·果蝇和线虫THAP 家族蛋白质功能研究 | 第12-13页 |
·人THAP 家族蛋白质功能研究进展 | 第13-15页 |
·PCBP1 研究进展 | 第15-18页 |
·PCBP1 结构特征 | 第15页 |
·PCBP1 生物学功能 | 第15-18页 |
·在转录水平上参与基因表达调控 | 第15-16页 |
·参与mRNA 加工 | 第16页 |
·稳定mRNA | 第16-17页 |
·在翻译水平上参与基因表达调控 | 第17-18页 |
·对本论文的研究启示 | 第18-19页 |
第二章 THAP11与PCBP1相互作用区域的确定 | 第19-30页 |
·材料与方法 | 第19-25页 |
·材料 | 第19-22页 |
·菌株和细胞株 | 第19页 |
·质粒载体 | 第19页 |
·引物 | 第19页 |
·主要试剂 | 第19-20页 |
·细菌培养基配制 | 第20页 |
·细胞培养相关溶液配制 | 第20页 |
·Western-blot 相关试剂 | 第20-21页 |
·细胞总蛋白提取相关溶液 | 第21页 |
·主要仪器 | 第21-22页 |
·研究方法 | 第22-25页 |
·THAP11 与PCBP1 缺失体的构建 | 第22页 |
·回收、酶切 | 第22页 |
·连接 | 第22页 |
·转化 | 第22页 |
·菌落PCR | 第22-23页 |
·质粒提取 | 第23页 |
·细胞转染(Vigorous 公司) | 第23-24页 |
·细胞总蛋白提取 | 第24页 |
·免疫共沉淀(co-immuno precipitatition ,Co-IP) | 第24-25页 |
·Western Blot | 第25页 |
·实验结果 | 第25-27页 |
·THAP11 及PCBP1 缺失体构建 | 第25-26页 |
·THAP11/PCBP1 相互作用结构区域的确定 | 第26-27页 |
·讨论 | 第27-30页 |
第三章 THAP11/PCBP1相互作用抑制CD44mRNA可变剪接 | 第30-55页 |
·实验材料与方法 | 第31-35页 |
·实验材料 | 第31页 |
·细胞和质粒 | 第31页 |
·实验仪器 | 第31页 |
·其他材料 | 第31页 |
·实验方法 | 第31-35页 |
·荧光素酶报道基因检测 | 第31-32页 |
·RNA 的提取 | 第32页 |
·RT-PCR | 第32-33页 |
·荧光定量PCR 技术 | 第33页 |
·细胞侵袭实验 | 第33-34页 |
·RNAi 技术 | 第34-35页 |
·实验结果 | 第35-50页 |
·THAP11/PCBP1 可以抑制细胞内源CD44v 的剪接水平 | 第35-38页 |
·THAP11/PCBP1 下调CD44 v5 inclusion | 第38-41页 |
·THAP11 的外显子剪接特异性依赖于PCBP1 | 第41-43页 |
·THAP11/PCBP1 下调Ras 对CD44 v5 inclusion 的激活 | 第43-45页 |
·THAP11 可以抑制肿瘤细胞侵袭 | 第45-48页 |
·THAP11 与CD44v6 表达相关性 | 第48-50页 |
·讨论与分析 | 第50-55页 |
第四章 THAP11/PCBP1可以抑制NF-κB的转录活性 | 第55-64页 |
·实验材料与方法 | 第55-58页 |
·实验材料 | 第55页 |
·EMSA(Electrophoretic Mobility Shift Assay 凝胶迁移实验) | 第55-58页 |
·核蛋白的提取 | 第55-56页 |
·EMSA 胶的配制 | 第56页 |
·探针标记 | 第56页 |
·探针与核蛋白结合 | 第56-57页 |
·电泳分析 | 第57-58页 |
·实验结果 | 第58-61页 |
·THAP11/PCBP1 抑制NF-κB 的转录活性 | 第58-59页 |
·THAP11/PCBP1 选择性抑制NF-κB 下游基因IL-6 启动子的活性 | 第59页 |
·THAP11/PCBP1 对NF-κB 的DNA 结合活性无影响 | 第59-60页 |
·THAP11/PCBP1 可能通过不同的途径来抑制NF-κB 的转录活性 | 第60-61页 |
·分析与讨论 | 第61-64页 |
第五章 研究总结与展望 | 第64-65页 |
·研究结论 | 第64页 |
·研究展望 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-72页 |
参加科研情况说明 | 第72-73页 |
致谢 | 第73-74页 |
附录一 引物序列、名称 | 第74-75页 |
附录二 英文缩略语 | 第75页 |