| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-30页 |
| 1.1 外泌体的生物学特征 | 第14-18页 |
| 1.1.1 外泌体的形成过程 | 第15-16页 |
| 1.1.2 外泌体携带的内容物 | 第16-17页 |
| 1.1.3 外泌体在细胞间传递重要信息 | 第17-18页 |
| 1.1.4 外泌体的释放过程 | 第18页 |
| 1.2 外泌体在病毒感染中的作用 | 第18-22页 |
| 1.2.1 病毒调控外泌体的形成 | 第19页 |
| 1.2.2 外泌体介导病毒感染 | 第19-20页 |
| 1.2.3 外泌体携带病毒相关信息物质 | 第20-21页 |
| 1.2.4 外泌体调控免疫应答 | 第21-22页 |
| 1.3 外泌体纯化及鉴定方法 | 第22-23页 |
| 1.4 病毒、外泌体与自噬之间的相互作用关系 | 第23-27页 |
| 1.4.1 自噬的基本特征 | 第23-24页 |
| 1.4.2 自噬与病毒感染之间的关系 | 第24-26页 |
| 1.4.3 自噬对外泌体分泌的影响 | 第26-27页 |
| 1.5 外泌体的应用前景 | 第27-28页 |
| 1.5.1 外泌体的靶向药物作用 | 第27页 |
| 1.5.2 外泌体在精准诊断中的作用 | 第27-28页 |
| 1.5.3 外泌体的疫苗开发潜能 | 第28页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 山羊副流感病毒3型流行病学调查及分离鉴定 | 第30-41页 |
| 2.1 材料与方法 | 第30-34页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.2 仪器设备与试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 CPIV3抗体的bELISA检测 | 第31页 |
| 2.1.4 CPIV3病原的荧光定量RT-PCR检测 | 第31-32页 |
| 2.1.5 M基因片段的RT-PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.1.6 病毒分离及鉴定 | 第33页 |
| 2.1.7 CPIV3全基因组扩增 | 第33-34页 |
| 2.1.8 基因进化分析 | 第34页 |
| 2.1.9 电镜观察病毒形态 | 第34页 |
| 2.2 结果 | 第34-39页 |
| 2.2.1 CPIV3感染绵羊的血清学调查 | 第34-36页 |
| 2.2.2 CPIV3感染绵羊的病原学调查 | 第36页 |
| 2.2.3 M基因扩增及进化分析 | 第36-37页 |
| 2.2.4 病毒分离鉴定及基因组分析 | 第37-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 CPIV3感染MDBK细胞释放的外泌体分离及鉴定 | 第41-57页 |
| 3.1 材料与方法 | 第41-47页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.2 仪器设备与试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 MDBK细胞培养 | 第42页 |
| 3.1.4 病毒TCID——50检测 | 第42页 |
| 3.1.5 CPIV3 接种及培养物上清的收集 | 第42-43页 |
| 3.1.6 超速离心法提取外泌体 | 第43页 |
| 3.1.7 CD63 免疫磁珠法纯化外泌体 | 第43页 |
| 3.1.8 蔗糖密度梯度离心法纯化外泌体 | 第43-44页 |
| 3.1.9 外泌体粒径分布检测 | 第44页 |
| 3.1.10 外泌体中小RNA的高通量测序鉴定 | 第44页 |
| 3.1.11 外泌体携带蛋白的质谱分析 | 第44页 |
| 3.1.12 外泌体电镜样品的制备与观察 | 第44-45页 |
| 3.1.13 免疫电镜样品的制备与观察 | 第45页 |
| 3.1.14 荧光定量RT-PCR检测mRNA | 第45-46页 |
| 3.1.15 miRNA纯化及荧光定量RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.1.16 Western blot检测 | 第47页 |
| 3.2 结果 | 第47-54页 |
| 3.2.1 CPIV3感染细胞外泌体的特征鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.2 外泌体装载病毒蛋白 | 第49-50页 |
| 3.2.3 外泌体携带病毒RNA | 第50页 |
| 3.2.4 外泌体miRNA的鉴定 | 第50-52页 |
| 3.2.5 外泌体miRNA靶基因预测及功能分析 | 第52-54页 |
| 3.3 讨论 | 第54-57页 |
| 第四章 外泌体在CPIV3感染中的作用 | 第57-69页 |
| 4.1 材料与方法 | 第57-60页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第57页 |
| 4.1.2 仪器设备与试剂 | 第57-58页 |
| 4.1.3 外泌体摄入实验 | 第58页 |
| 4.1.4 细胞的外泌体、病毒处理及样品收集 | 第58页 |
| 4.1.5 Western blot方法检测蛋白 | 第58页 |
| 4.1.6 qRT-PCR方法检测RNA | 第58-59页 |
| 4.1.7 细胞自噬水平的荧光观察及分析 | 第59页 |
| 4.1.8 miRNA转染MDBK细胞 | 第59-60页 |
| 4.2 结果 | 第60-66页 |
| 4.2.1 MDBK细胞可主动摄入外泌体 | 第60-61页 |
| 4.2.2 外泌体介导CPIV3感染 | 第61-62页 |
| 4.2.3 外泌体抑制细胞自噬 | 第62-64页 |
| 4.2.4 CPIV3感染抑制细胞自噬 | 第64-65页 |
| 4.2.5 miR-126-3p抑制细胞自噬 | 第65页 |
| 4.2.6 外泌体抑制细胞因子表达 | 第65-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-69页 |
| 第五章 自噬对CPIV3复制及外泌体分泌的影响 | 第69-79页 |
| 5.1 材料与方法 | 第69-71页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第69-70页 |
| 5.1.2 仪器设备与试剂 | 第70页 |
| 5.1.3 MDBK细胞的处理、样品收集及检测 | 第70-71页 |
| 5.2 结果 | 第71-77页 |
| 5.2.1 自噬对CPIV3复制的影响 | 第71-73页 |
| 5.2.2 自噬对外泌体分泌的影响 | 第73-75页 |
| 5.2.3 自噬对外泌体形成的影响 | 第75-76页 |
| 5.2.4 不同滴度CPIV3感染对外泌体形成的影响 | 第76-77页 |
| 5.3 讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 外泌体分泌对CPIV3复制及自噬的影响 | 第79-92页 |
| 6.1 材料与方法 | 第79-82页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第79页 |
| 6.1.2 仪器设备与试剂 | 第79-80页 |
| 6.1.3 脂质膜DiD标记实验 | 第80页 |
| 6.1.4 GW4869处理细胞的蛋白和RNA检测 | 第80-81页 |
| 6.1.5 激光共聚焦显微镜观察细胞内蛋白分布及定位 | 第81页 |
| 6.1.6 电镜观察细胞内自噬溶酶体 | 第81-82页 |
| 6.2 结果 | 第82-89页 |
| 6.2.1 外泌体分泌对病毒复制的影响 | 第82-84页 |
| 6.2.2 外泌体分泌对病毒蛋白和MVBs分布的影响 | 第84-86页 |
| 6.2.3 外泌体分泌对细胞自噬的影响 | 第86-88页 |
| 6.2.4 自噬溶酶体的电镜观察 | 第88-89页 |
| 6.3 讨论 | 第89-92页 |
| 第七章 全文结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 作者简历 | 第108页 |
