| 摘要 | 第3-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 前言 | 第23-29页 |
| 第一章 一期梅毒动物模型的建立和TP0136转录水平的检测 | 第29-46页 |
| 第一节 材料与方法 | 第29-35页 |
| 1.1.1 伦理论证 | 第29页 |
| 1.1.2 动物准备 | 第29页 |
| 1.1.3 梅毒螺旋体传代培养 | 第29页 |
| 1.1.4 一期梅毒兔模型建立 | 第29-30页 |
| 1.1.5 TP0136序列分析和引物设计 | 第30-32页 |
| 1.1.6 Ultraspec RNA分离液分离提取总RNA | 第32页 |
| 1.1.7 TURBO DNA酶去除总RNA中基因组DNA | 第32-33页 |
| 1.1.8 SuperScript Ⅲ第一链合成系统合成cDNA | 第33页 |
| 1.1.9 常规PCR扩增TP0136 | 第33页 |
| 1.1.10 TP0136质粒标准品构建 | 第33-34页 |
| 1.1.11 实时荧光定量PCR检测TP0136和TP0574 mRNA | 第34-35页 |
| 1.1.12 统计分析 | 第35页 |
| 第二节 结果 | 第35-44页 |
| 1.2.1 TP0136序列分析结果 | 第35-39页 |
| 1.2.2 一期梅毒兔模型硬下疳形成过程 | 第39-40页 |
| 1.2.3 常规PCR扩增TP0136 cDNA结果 | 第40-41页 |
| 1.2.4 TP0136克隆后转化子测序结果 | 第41页 |
| 1.2.5 实时荧光定量PCR检测TP0136和TP0574 mRNA结果 | 第41-43页 |
| 1.2.6 TP0136/TP0574 mRNA结果 | 第43-44页 |
| 第三节 小结 | 第44-46页 |
| 第二章 TP0136基因异质性研究 | 第46-65页 |
| 第一节 材料与方法 | 第46-54页 |
| 2.1.1 梅毒螺旋体菌株的传代和分离 | 第46-48页 |
| 2.1.2 从兔睾丸组织中提取梅毒螺旋体DNA | 第48-49页 |
| 2.1.3 TP0136引物设计 | 第49-51页 |
| 2.1.4 梅毒螺旋体DNA扩增和扩增后测序 | 第51页 |
| 2.1.5 PEX 5-CT载体克隆操作过程 | 第51-53页 |
| 2.1.6 序列分析 | 第53-54页 |
| 第二节 结果 | 第54-64页 |
| 2.2.1 八株梅毒螺旋体TP0136开放阅读框架氨基酸和核酸序列 | 第54-56页 |
| 2.2.2 株临床分离株TP0136 ORF氨基酸序列和核酸序列 | 第56-60页 |
| 2.2.3 TP0136 ORF氨基酸序列比对分析 | 第60-64页 |
| 第三节 小结 | 第64-65页 |
| 第三章 Nichols Houston和Nichols Seattle株两个TP0136全长ORF蛋白的表达和纯化(ZYM法) | 第65-82页 |
| 第一节 材料与方法 | 第65-77页 |
| 3.1.1 材料 | 第65-69页 |
| 3.1.2 TP0136 ORF pEXP-5-CT表达载体的构建 | 第69页 |
| 3.1.3 Nichols Houston和Nichols Seattle TP0136全长ORF蛋白的表达和纯化 | 第69-71页 |
| 3.1.4 SDS-PAGE和Western Blot检测 | 第71-75页 |
| 3.1.5 BCA蛋白定量测定 | 第75-77页 |
| 第二节 结果 | 第77-81页 |
| 3.2.1 常规PCR扩增TP0136 ORF DNA结果 | 第77-78页 |
| 3.2.2 TP0136-pEXP-5-CT转化子 | 第78-79页 |
| 3.2.3 印记法验证Nichols Houston和Nichols Seattle TP0136全长ORF蛋白 | 第79-80页 |
| 3.2.4 BCA测定纯化后蛋白浓度 | 第80-81页 |
| 第三节 小结 | 第81-82页 |
| 第四章 Nichols Houston和Nichols Seattle株四个TP0136片段蛋白的表达和纯化(IPTG法) | 第82-88页 |
| 第一节 材料与方法 | 第82-83页 |
| 4.1.1 四个TP0136片段蛋白pEXP-5-CT表达载体的构建 | 第82页 |
| 4.1.2 四个TP0136片段蛋白的表达 | 第82-83页 |
| 4.1.3 Nichols Houston和Nichols Seattle TP0136全长ORF蛋白的纯化 | 第83页 |
| 第二节 结果 | 第83-87页 |
| 4.2.1 常规PCR扩增TP0136 ORF片段 | 第83-84页 |
| 4.2.2 TP0136 ORF片段与pEXP-5-CT转化子 | 第84-85页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE和Western Blot验证TP0136 ORF片段蛋白 | 第85-87页 |
| 4.2.4 BCA测定纯化后蛋白浓度 | 第87页 |
| 第三节 小结 | 第87-88页 |
| 第五章 六个重组TP0136蛋白黏附纤连蛋白实验 | 第88-97页 |
| 第一节 材料与方法 | 第88-89页 |
| 5.1.1 包被FN | 第88页 |
| 5.1.2 3%BSA封闭 | 第88页 |
| 5.1.3 ELISA板加入不同浓度重组蛋白 | 第88页 |
| 5.1.4 加抗His抗体 | 第88页 |
| 5.1.5 加二抗 | 第88-89页 |
| 5.1.6 显色 | 第89页 |
| 5.1.7 显影缓冲液配方 | 第89页 |
| 5.1.8 统计分析 | 第89页 |
| 第二节 结果 | 第89-96页 |
| 5.2.1 不同TP0136蛋白黏附血浆FN的比较 | 第89-92页 |
| 5.2.2 5个不同浓度的TP0136蛋白黏附细胞FN统计结果 | 第92-95页 |
| 5.2.3 六个不同TP0136蛋白黏附血浆和细胞FN亲和力的比较 | 第95-96页 |
| 第三节 小结 | 第96-97页 |
| 第六章 重组TP0136蛋白抑制梅毒螺旋体黏附血浆和细胞FN实验 | 第97-104页 |
| 第一节 材料与方法 | 第97-98页 |
| 6.1.1 Lab-Tek Ⅱ小室包被血浆和细胞FN | 第97页 |
| 6.1.2 BSA封闭 | 第97页 |
| 6.1.3 加受检的六个重组TP0136蛋白 | 第97页 |
| 6.1.4 Nichols Seattle株传代培养 | 第97页 |
| 6.1.5 制备梅毒螺旋体悬液 | 第97页 |
| 6.1.6 梅毒螺旋体计数 | 第97-98页 |
| 6.1.7 梅毒螺旋体黏附FN | 第98页 |
| 6.1.8 计数Lab-Tek Ⅱ小室中黏附的梅毒螺旋体 | 第98页 |
| 6.1.9 统计分析 | 第98页 |
| 第二节 结果 | 第98-102页 |
| 6.2.1 TP0136蛋白抑制Tp黏附血浆FN的统计结果 | 第98-100页 |
| 6.2.2 TP0136蛋白抑制梅毒螺旋体黏附细胞FN的结果比较 | 第100-102页 |
| 第三节 小结 | 第102-104页 |
| 第七章 抗TP0136多克隆抗体制备及抗体与重组蛋白血清反应实验 | 第104-114页 |
| 第一节 材料与方法 | 第104-105页 |
| 7.1.1 免疫佐剂的准备 | 第104页 |
| 7.1.2 兔免疫实验 | 第104页 |
| 7.1.3 制备吸附血清 | 第104页 |
| 7.1.4 包被重组蛋白 | 第104页 |
| 7.1.5 3%NFM封闭 | 第104-105页 |
| 7.1.6 加含抗TP0136抗体血清 | 第105页 |
| 7.1.7 加二抗 | 第105页 |
| 7.1.8 显色 | 第105页 |
| 7.1.9 统计分析 | 第105页 |
| 第二节 结果 | 第105-112页 |
| 7.2.1 不同稀释倍数下TP0136flH免疫前、后Houston组个体兔与总体血清结果比较 | 第105-106页 |
| 7.2.2 不同稀释倍数下TP0136flS免疫前后Seattle组个体兔与总体血清结果比较 | 第106-107页 |
| 7.2.3 1:250和1:1000稀释倍数下TP0136flH免疫前后Houston组兔血清对6个重组TP0136蛋白反应情况 | 第107-108页 |
| 7.2.4 1:250和1:1000稀释倍数下TP0136flS免疫前、后Seattle组兔血清对6个重组TP0136蛋白反应情况 | 第108-110页 |
| 7.2.5 1:1000稀释倍数下TP0136flH和TP0136flS免疫后两组兔血清对6个重组TP0136蛋白反应情况比较 | 第110-112页 |
| 第三节 小结 | 第112-114页 |
| 第八章 抗TP0136特异性抗体抑制梅毒螺旋体黏附血浆和细胞FN实验 | 第114-118页 |
| 第一节 材料与方法 | 第114-115页 |
| 8.1.1 Lab-Tek Ⅱ小室包被FN | 第114页 |
| 8.1.2 3%BSA封闭 | 第114页 |
| 8.1.3 制备吸附血清 | 第114页 |
| 8.1.4 梅毒螺旋体传代培养 | 第114页 |
| 8.1.5 制备梅毒螺旋体菌悬液 | 第114页 |
| 8.1.6 稀释梅毒螺旋体到所需浓度 | 第114-115页 |
| 8.1.7 抗TP0136抗血清与梅毒螺旋体共孵育 | 第115页 |
| 8.1.8 计数Lab-Tek Ⅱ小室梅毒螺旋体数 | 第115页 |
| 8.1.9 统计分析 | 第115页 |
| 第二节 结果 | 第115-117页 |
| 8.2.1 抗TP0136特异性抗体抑制梅毒螺旋体黏附血浆和细胞FN实验结果 | 第115-117页 |
| 第三节 小结 | 第117-118页 |
| 讨论 | 第118-122页 |
| 结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-130页 |
| 综述 | 第130-137页 |
| 参考文献 | 第133-137页 |
| 缩略词表 | 第137-140页 |
| 攻读博士学位期间成果 | 第140-142页 |
| 致谢 | 第142-145页 |
| 统计学审稿证明 | 第145页 |
