| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第4-11页 |
| 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 微生物脂肪酶的研究现状 | 第11-15页 |
| 1.1.1 微生物脂肪酶的来源 | 第11-12页 |
| 1.1.2 微生物脂肪酶的理化性质 | 第12-13页 |
| 1.1.3 微生物脂肪酶的特点 | 第13-15页 |
| 1.2 氧阴离子洞的研究现状 | 第15-19页 |
| 1.2.1 氧阴离子洞的概念、组成及功能 | 第15-17页 |
| 1.2.2 非脂肪酶氧阴离子洞的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2.3 脂肪酶氧阴离子洞的研究现状 | 第18-19页 |
| 1.3 微生物脂肪酶的分子进化研究现状 | 第19-22页 |
| 1.3.1 分子进化概述 | 第19-20页 |
| 1.3.2 定点饱和突变 | 第20-21页 |
| 1.3.3 高通量筛选(High throughput screening,HTS) | 第21页 |
| 1.3.4 构建进化树(Evolutionary tree) | 第21-22页 |
| 1.4 本论文的研究思路及意义 | 第22-25页 |
| 第一章 氧阴离子洞结构的同源置换 | 第25-41页 |
| 1.1 前言 | 第25页 |
| 1.2 材料 | 第25-26页 |
| 1.2.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.2.3 主要仪器设备 | 第26页 |
| 1.2.4 主要试剂和培养基的配置 | 第26页 |
| 1.3 实验方法 | 第26-32页 |
| 1.3.1 突变引物设计 | 第26-27页 |
| 1.3.2 重组质粒pET-51b(+)-PEL的构建 | 第27-30页 |
| 1.3.3 制备大肠杆菌DH5α感受态细胞和质粒转化 | 第30-31页 |
| 1.3.4 定点突变文库的构建 | 第31-32页 |
| 1.4 结果 | 第32-36页 |
| 1.4.1 质粒pET-51b(+)的验证 | 第32-33页 |
| 1.4.2 PEL片段的扩增结果 | 第33-34页 |
| 1.4.3 重组质粒pET-51b(+)-PEL双酶切验证 | 第34页 |
| 1.4.4 全质粒PCR产物的验证 | 第34-35页 |
| 1.4.5 突变质粒的验证 | 第35-36页 |
| 1.5 讨论 | 第36-41页 |
| 第二章 同源置换突变体的酶活研究 | 第41-51页 |
| 2.1 前言 | 第41页 |
| 2.2 材料 | 第41-42页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第41页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第41页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.4 主要试剂及培养基的配制 | 第42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-44页 |
| 2.3.1 获得突变重组质粒 | 第42页 |
| 2.3.2 大肠杆菌BL 21感受态的制备及转化 | 第42页 |
| 2.3.3 BL21的诱导表达 | 第42-43页 |
| 2.3.4 脂肪酶突变体的性质鉴定 | 第43-44页 |
| 2.4 结果与分析 | 第44-47页 |
| 2.4.1 大肠杆菌BL21的转化 | 第44页 |
| 2.4.2 脂肪酶突变体的诱导表达 | 第44-45页 |
| 2.4.3 脂肪酶突变体的活性测定 | 第45-47页 |
| 2.5 讨论 | 第47-51页 |
| 第三章 氧阴离子洞构成位点131、133的突变体构建及高活性突变体的筛选 | 第51-59页 |
| 3.1 前言 | 第51页 |
| 3.2 材料 | 第51页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第51页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第51页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第51页 |
| 3.2.4 主要试剂及培养基配制 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.3.1 设计突变引物 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组质粒pET-51b(+)-PEL的构建 | 第52页 |
| 3.3.3 突变文库的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.4 脂肪酶突变体的鉴定和测序 | 第53页 |
| 3.4 结果 | 第53-56页 |
| 3.4.1 质粒pET-51b(+)-PEL的抽提 | 第53-54页 |
| 3.4.2 全质粒PCR的验证 | 第54页 |
| 3.4.3 突变体文库的构建 | 第54-55页 |
| 3.4.4 突变体的筛选 | 第55-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 脂肪酶突变体的真核表达 | 第59-73页 |
| 4.1 前言 | 第59-60页 |
| 4.2 材料 | 第60-62页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第60页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第60页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 4.2.4 主要培养基及试剂配制 | 第60-62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-68页 |
| 4.3.1 突变重组质粒pAO815-PEL的构建 | 第62-65页 |
| 4.3.2 突变重组质粒pPIC 3.5k-PEL的构建 | 第65-66页 |
| 4.3.3 酵母感受态的制备 | 第66-68页 |
| 4.4 结果与分析 | 第68-72页 |
| 4.4.1 突变重组质粒pAO815-PEL的构建 | 第68-70页 |
| 4.4.2 突变重组质粒pPIC 3.5k-PEL的构建 | 第70-71页 |
| 4.4.3 转化酵母GS115 | 第71页 |
| 4.4.4 脂肪酶的诱导表达 | 第71-72页 |
| 4.5 讨论 | 第72-73页 |
| 第五章 总结与展望 | 第73-75页 |
| 1.1 创新点 | 第73页 |
| 1.2 总结 | 第73-74页 |
| 1.3 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 个人简历 | 第85-89页 |
