| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-26页 |
| 1.1 核苷酸类物质简介 | 第10页 |
| 1.2 核苷酸类物质的合成 | 第10-18页 |
| 1.2.1 传统合成方法 | 第11页 |
| 1.2.2 基于能量再生的核苷酸酶法合成 | 第11-15页 |
| 1.2.3 实验室前期研究工作 | 第15-18页 |
| 1.3 多酶催化系统的介绍 | 第18-20页 |
| 1.4 基因共表达系统简介 | 第20-22页 |
| 1.5 全细胞生物催化的研究 | 第22-23页 |
| 1.6 反应中所涉及核苷酸与酶的介绍 | 第23-24页 |
| 1.6.1 脱氧鸟苷酸和鸟苷酸 | 第23页 |
| 1.6.2 dGTP和GTP | 第23页 |
| 1.6.3 GTP和dGTP合成原理及过程设计 | 第23-24页 |
| 1.6.4 (d)GTP生物合成所涉及的酶 | 第24页 |
| 1.7 研究意义及研究过程 | 第24-26页 |
| 第2章 联合GMKase和ACKase合成dGTP和GTP | 第26-34页 |
| 2.1 实验材料与实验方法 | 第26-29页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 实验中的生化试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 菌株培养和细菌基因组的抽提 | 第27页 |
| 2.1.4 质粒提取 | 第27页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.1.6 目的基因的PCR扩增及纯化 | 第28页 |
| 2.1.7 PCR产物与质粒DNA双酶切 | 第28页 |
| 2.1.8 琼脂糖凝胶电泳及胶回收 | 第28页 |
| 2.1.9 连接 | 第28页 |
| 2.1.10 重组质粒转化 | 第28页 |
| 2.1.11 目标蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.1.12 蛋白电泳分析(SDS-PAGE) | 第29页 |
| 2.1.13 蛋白含量测定 | 第29页 |
| 2.1.14 酶活测定 | 第29页 |
| 2.1.15 生物合成GTP和dGTP | 第29页 |
| 2.1.16 核苷酸的测定 | 第29页 |
| 2.2 实验结果与讨论 | 第29-33页 |
| 2.2.1 酶蛋白的表达 | 第29-30页 |
| 2.2.2 GMKase和ACKase的酶活性测定 | 第30页 |
| 2.2.3 GMKase添加量对GTP和dGTP合成反应的影响 | 第30-31页 |
| 2.2.4 不同磷酸供体(NTP)对GTP和dGTP合成反应的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.5 磷酸供体ATP浓度对GTP和dGTP合成反应的影响 | 第32-33页 |
| 2.3 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 GMKase和ACKase共表达菌的构建与运用及渗透化研究 | 第34-42页 |
| 3.1 实验材料与实验方法 | 第35-36页 |
| 3.1.1 共表达重组菌株的构建 | 第35-36页 |
| 3.1.2 实验中的生化试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 细胞渗透化处理 | 第36页 |
| 3.1.4 生物合成GTP和dGTP | 第36页 |
| 3.2 实验结果与讨论 | 第36-40页 |
| 3.2.1 GMKase和ACKase的共表达 | 第36-37页 |
| 3.2.2 GMKase和ACKase的酶活性测定 | 第37页 |
| 3.2.3 加酶量对GTP和dGTP合成反应的影响 | 第37-39页 |
| 3.2.4 渗透化全细胞与游离酶之间的酶活性差异 | 第39-40页 |
| 3.3 本章小结 | 第40-42页 |
| 第4章 GMKase和ACKase的细菌细胞表面展示及运用 | 第42-54页 |
| 4.1 实验材料与实验方法 | 第42-44页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第42页 |
| 4.1.2 表面展示质粒的构建 | 第42-43页 |
| 4.1.3 目标蛋白的表达 | 第43页 |
| 4.1.4 细胞膜(壁)组分分离 | 第43页 |
| 4.1.5 免疫荧光分析 | 第43页 |
| 4.1.6 生物合成GTP和dGTP | 第43-44页 |
| 4.2 实验结果与讨论 | 第44-52页 |
| 4.2.1 ACKase和GMKase在大肠杆菌表面展示菌中的表达 | 第44-48页 |
| 4.2.2 GMKase和ACKase的酶活性测定 | 第48页 |
| 4.2.3 表面展示酶与游离酶之间的酶活性差异 | 第48-49页 |
| 4.2.4 全细胞催化剂添加量对(d)GTP合成反应的影响 | 第49-50页 |
| 4.2.5 全细胞催化剂的重复利用研究 | 第50-51页 |
| 4.2.6 全细胞酶的热稳定性研究 | 第51-52页 |
| 4.3 本章小结 | 第52-54页 |
| 第5章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 5.1 结论 | 第54页 |
| 5.2 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
