| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 乙酸及乙酸利用现状 | 第12-13页 |
| 1.1.1 大肠杆菌的乙酸利用 | 第12-13页 |
| 1.1.2 酵母的乙酸利用 | 第13页 |
| 1.2 乙酸代谢 | 第13-16页 |
| 1.2.1 乙酸与乙酰辅酶A | 第13-14页 |
| 1.2.2 真核生物的乙酸代谢 | 第14-15页 |
| 1.2.3 原核生物的乙酸代谢 | 第15-16页 |
| 1.3 乙酸转运 | 第16-19页 |
| 1.3.1 分子形式乙酸的转运 | 第17-18页 |
| 1.3.2 离子形式乙酸的转运 | 第18-19页 |
| 1.4 乙酸耐受 | 第19-20页 |
| 1.4.1 乙酸诱导下的酵母程序性死亡 | 第19页 |
| 1.4.2 酵母在乙酸诱导下的适应性 | 第19-20页 |
| 1.5 毕赤酵母 | 第20-21页 |
| 1.5.1 毕赤酵母的发展 | 第20-21页 |
| 1.5.2 毕赤酵母表达系统的优缺点 | 第21页 |
| 1.6 本课题的研究背景、创新点及课题意义 | 第21-23页 |
| 第2章 毕赤酵母激酶缺失文库中乙酸耐受相关激酶的筛选 | 第23-31页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 实验菌株和试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基和培养条件 | 第23-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-27页 |
| 2.3.1 激酶缺失株的活化 | 第26页 |
| 2.3.2 激酶缺失株的点板生长 | 第26-27页 |
| 2.4 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.4.1 激酶缺失菌株的培养 | 第27页 |
| 2.4.2 乙酸敏感型激酶缺失株 | 第27-30页 |
| 2.5 本章小结 | 第30-31页 |
| 第3章 乙酸耐受相关基因HRK1的功能 | 第31-49页 |
| 3.1 前言 | 第31页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 实验菌株与试剂 | 第31页 |
| 3.2.2 培养基与培养条件 | 第31-32页 |
| 3.2.3 基因扩增及载体组装 | 第32页 |
| 3.2.4 大肠杆菌TOP10感受态制备及转化 | 第32-34页 |
| 3.2.5 毕赤酵母感受态制备及电穿孔转化 | 第34页 |
| 3.2.6 毕赤酵母基因组的提取 | 第34-35页 |
| 3.2.7 用于ATPase酶活检测的总蛋白提取 | 第35页 |
| 3.2.8 6-甲基水杨酸的摇瓶水平表达 | 第35页 |
| 3.2.9 6-甲基水杨酸的测定 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第36-48页 |
| 3.3.1 乙酸耐受相关基因hrk1的克隆和质粒构建 | 第36-38页 |
| 3.3.2 乙酸耐受相关基因pma1的克隆和质粒构建 | 第38-39页 |
| 3.3.3 乙酸耐受相关基因hrk1和pma1共表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.4 回补菌株Δhrk1-hrk1的构建 | 第40页 |
| 3.3.5 重组菌株GS-hrk1、GS-pma1和GS-hrk1/pma1的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.6 重组菌株XN-hrk1、XN-pma1和XN-hrk1/pma1的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.7 Hrk1激酶在乙酸压力下对生长的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.8 重组菌株GS-hrk1、GS-pma1及GS-hrk1/pma1胞外pH | 第44-45页 |
| 3.3.9 菌株GS115和Δhrk1的ATPase酶活 | 第45-46页 |
| 3.3.10 重组菌株XN-hrk1、XN-pma1和XN-hrk1/pma1的6-甲基水杨酸合成 | 第46-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第4章 乙酸转运蛋白SCFPS1~*的功能 | 第49-56页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料及方法 | 第49页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第49-55页 |
| 4.3.1 基因Scfps1~*基因的获得及质粒pAG32-5AOX-Scfps1~*的构建 | 第49-52页 |
| 4.3.2 重组菌株GS-Scfps1~*和XN-Scfps1~*的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.3 重组菌株GS-Scfps1~*的乙酸转运能力 | 第53-54页 |
| 4.3.4 重组菌株XN-Scfps1~*的6-甲基水杨酸合成 | 第54-55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第5章 乙酸代谢基因的过表达 | 第56-64页 |
| 5.1 前言 | 第56页 |
| 5.2 实验材料及方法 | 第56页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第56-63页 |
| 5.3.1 基因PpAcs1的获得和质粒构建 | 第56-57页 |
| 5.3.2 基因ScAcs1~*的获得和质粒构建 | 第57-59页 |
| 5.3.3 基因pta和ackA的获得和质粒构建 | 第59-61页 |
| 5.3.4 重组菌株XN-PpAcs1、XN-ScAcs1~*和XN-pta/ackA的构建 | 第61-62页 |
| 5.3.5 重组菌株XN-PpAcs1、XN-ScAcs1~*和XN-pta/ackA的6-甲基水杨酸合成 | 第62-63页 |
| 5.4 本章小结 | 第63-64页 |
| 第6章 乙酸耐受和代谢相关基因共同促进乙酸的利用 | 第64-69页 |
| 6.1 前言 | 第64页 |
| 6.2 实验材料及方法 | 第64-65页 |
| 6.3 实验结果与讨论 | 第65-68页 |
| 6.3.1 重组菌株XN-hrk1-PpAcs1和XN-hrk1-ScAcs1~*的构建 | 第65-66页 |
| 6.3.2 重组菌株XN-hrk1-PpAcs1和XN-hrk1-ScAcs1~*的6-甲基水杨酸合成 | 第66-68页 |
| 6.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第7章 结论与展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士学位期间撰写的论文 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-78页 |
