| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一篇 文献综述 | 第10-28页 |
| 第一章 猪链球菌及其毒力因子 | 第10-22页 |
| 1 猪链球菌介绍及危害 | 第10-11页 |
| 2 猪链球菌毒力因子 | 第11-18页 |
| 2.1 核酸酶和核苷酸酶 | 第15页 |
| 2.2 LysM | 第15-16页 |
| 2.3 透明质酸酶 | 第16页 |
| 2.4 烯醇酶 | 第16页 |
| 2.5 sRNA | 第16-18页 |
| 参考文献 | 第18-22页 |
| 第二章 小RNA靶位鉴定 | 第22-28页 |
| 1 sRNA靶位的生物信息学预测 | 第22-23页 |
| 2 sRNA靶位的鉴定和验证 | 第23-26页 |
| 参考文献 | 第26-28页 |
| 第二篇 实验研究 | 第28-56页 |
| 第三章 DNA核酸酶与猪链球菌9型毒力的关系 | 第28-42页 |
| 1 材料和方法 | 第29-33页 |
| 1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第29页 |
| 1.3 ssnA缺失质粒的构建 | 第29页 |
| 1.4 无痕缺失株的筛选 | 第29-30页 |
| 1.5 截短SsnA(rSsnA)的表达纯化及兔抗血清的制备 | 第30-31页 |
| 1.6 Western blot检测SsnA | 第31页 |
| 1.7 斑马鱼毒力试验 | 第31页 |
| 1.8 HEp-2细胞黏附试验 | 第31-32页 |
| 1.9 猪全血存活试验 | 第32页 |
| 1.10 DNA核酸酶活性检测 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-38页 |
| 2.1 ssnA缺失菌株的构建和鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2 rSsnA的表达及Western blot检测SsnA | 第34-35页 |
| 2.3 斑马鱼毒力试验 | 第35-36页 |
| 2.4 HEp-2细胞黏附试验 | 第36页 |
| 2.5 猪全血存活试验 | 第36-37页 |
| 2.6 DNA酶活性的检测 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 第四章 猪链球菌小RNA靶位鉴定 | 第42-56页 |
| 1 方法与材料 | 第43-47页 |
| 1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第43页 |
| 1.3 表达融合sRNA质粒及菌株的构建 | 第43-45页 |
| 1.4 MS2-MBP融合蛋白的制备与纯化 | 第45页 |
| 1.5 sRNA与靶位mRNA复合物的收集纯化 | 第45-46页 |
| 1.6 候选靶位基因SSU0057-Flag融合表达质粒及菌株的构建 | 第46-47页 |
| 1.7 Western Blot测定靶位基因的表达量 | 第47页 |
| 2 结果 | 第47-53页 |
| 2.1 表达融合sRNA质粒及菌株构建 | 第47-48页 |
| 2.2 MS2-MBP融合蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 2.3 RNA-seq及候选靶位筛选 | 第49-50页 |
| 2.4 候选靶位基因SSU0057-Flag融合表达质粒及菌株的构建 | 第50-51页 |
| 2.5 Western Blot判定rss06对SSU0057翻译的影响 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-56页 |
| 全文总结 | 第56-58页 |
| 已发表论文 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
